文档介绍：仪器分析实验教案实验题目: 高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸教学目标: 1 、了解高效液相色谱仪的基本结构及操作步骤。 2、理解反相色谱的原理及应用。 3 、学****物质分离的条件选择。 4 、学****物质的定性和定量分析方法教学重点: 掌握物质分离操作条件的选择方法。教学难点: 了解高效液相色谱仪的基本结构及操作步骤。仪器药品: LC-2010 高效液相色谱仪; 色谱柱 VP-ODS ( × 15cm ); 微量注射器; 超声处理器; 高纯水; 甲醇( AR ); 苯甲酸( AR ); 磷酸二氢钾( AR )。教学方法: 讲授、演示教学时数: 4 学时教学过程: (教师授课思路、设问及讲解要点) 一、实验原理高效液相色谱法的原理与气相色谱法相似, 但以液体为流动相,适合于分析高沸点的有机化合物、高分子、热稳定性比较差以及具有生物活性的物质。苯甲酸具有抑制细菌生长和繁殖的作用, 广泛应用于食品工业中作为防腐剂。但是苯甲酸的过量摄入, 可对人们的健康造成危害: 如苯甲酸进入人体后, 仪器分析实验教案在肝脏内与甘氨酸结合,代谢成马尿酸由尿排出,对肝脏造成一定的损害; 同时口服过多的苯甲酸, 在体内积蓄过多会对身体造成一定的危害。国家限定碳酸饮料中苯甲酸的浓度不得超过 , 由于苯甲酸价格低廉在食品工业中得到广泛的应用, 因此有必要学****苯甲酸的高效液相色谱法分离分析的操作方法、分离条件的选择以及定性和定量的分析方法。苯甲酸易溶于甲醇等有机溶剂, 略溶于水, 因此苯甲酸为极性化合物, 可以用甲醇与水的混和流动相进行色谱分离分析;同时苯甲酸为弱酸性化合物,在水中存在部分电离。因此正确选择流动相的极性和缓冲流动相合适的 PH 是决定分离好坏的关键。当采用甲醇与水作流动相时, 甲醇和水的比例不同时, 流动相的极性得到改变, 苯甲酸的峰形以及保留时间都有所改变,同时缓冲流动相合适的 PH 值可以改变峰的对称性以及解决拖尾现象,达到分离苯甲酸的目的, 并可对分析情况作出正确的评价。检测器是检测采集被分离分析物质的重要因素。一个理想的液相色谱检测器应具备以下特征: 灵敏度高; 对所检测的物质具有快速的响应, 并且响应对流动相流量和温度变化不敏感;不引起柱外谱带扩展; 线性范围宽,适用的范围广。对于紫外检测器而言, 应要求被分离分析的物质在紫外检测波长范围内有吸收, 同时要求流动相在紫外区无吸收。由于苯甲酸的在 230nm 波长处有紫外吸收, 同时甲醇和水所组成的混合流动相在该波长处无吸收, 因此紫外检测器选择在 230nm 波长进行检测。液相色谱分离分析一般在室温下进行, 因此柱温的选择不作为重点考虑的因素。 1 、定性分析: 在确定的色谱分离条件下, 苯甲仪器分析实验教案酸有一定的保留时间, 在相同的实验条件下, 分别测定苯甲酸纯物质和饮料样品中各组分的保留值, 将两者进行对比,就可确定饮料中何种组分为苯甲酸,对其进行定性。 2 、定量分析:由于不同饮料样品中苯甲酸的含量不同, 其峰面积也不相同, 因此可以利用峰面积与含量的对应关系,计算饮料样品中苯甲酸的含量。即先配制标准浓度的苯甲酸, 定量进样,由被测组分和标准组分的峰面积比来求得被测组分的浓度。计算公式下: 式( 1 )中: Ci 为样品浓度, mg/ml; Cs 为标准品浓度, mg/ml