文档介绍:一、实验目的
; ; 。
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二、实验原理
(一) 蛋白质沉淀原理
蛋白质溶于水形成稳定的胶体溶液,维持蛋白质胶体溶液稳定因素:
;
。
去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀析出。
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蛋白质沉淀析出常用的方法有等电点法、盐析法、重金属离子沉淀法、有机酸试剂沉淀法、有机溶剂沉淀法等。
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(二)蛋白质变性原理
蛋白质受某些物理或化学因素的影响,空间结构发生改变,生物活性丧失。称为蛋白质变性。
蛋白质变性,分可逆;不可逆。
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三、实验仪器与试剂
试管、刻度吸量管、洗耳球等。
5%蛋白质溶液、 %蛋白质溶液、10%ZnSO4溶液、 、 1%三***醋酸、无水乙醇、NaCl(固体)
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四、实验内容及操作步骤
(一)实验内容
(二)操作步骤
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1)实验原理
C
O
O
-
N
H
3
+
P
O
H
-
H
+
重
金
属
离
子
M
+
酸
根
X
-
C
O
O
-
N
H
2
P
C
O
O
H
N
H
3
+
P
C
O
O
-
M
+
N
H
2
P
C
O
O
H
N
H
3
+
X
-
P
pH > pI
pH < pI
pI
***离子
负电荷
正电荷
盐↓
盐↓
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2)操作步骤
试剂(滴)
试管1
试管2
试管3
5%蛋白质溶液
2D
2D
2D
NaOH
2D
—
—
10% ZnSO4
20D
—
20D
1%三***醋酸
—
20D
—
现象
3)观察、记录实验现象,并解释之。
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2. 乙醇沉淀蛋白质
1)实验原理
乙醇溶解于水,破坏蛋白质分子的水化膜,加入少量中性盐抑制蛋白质的解离,使电荷减少,沉淀更完全。
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2)操作步骤
试剂(mL)
试管1
试管2
%蛋白质溶液
mL
mL
结晶NaCl
—
数粒(适量)
无水乙醇
1mL
1mL
现象
3)观察、记录实验现象,并解释之。
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