文档介绍：菌种操作规程
（Master Operation Procedure for ARA Production Strain）
CA/WA001—2004版
1目的
建立菌种操作规程，确保菌种保藏、自然选育、生产供种操作规范性，提供优质高产的生产菌种。
2 范围
生产一部菌种组。
3 责任
菌种组操作人员负责本操作规程的实施。
安瓿管的制备
空白安瓿管的制备
安瓿管有三种：手榴弹形、球形、直形。任意选取一种放于***钾-浓硫酸溶液（100g/mL）中浸泡10h，然后取出用自来水反复冲洗多次，最后用蒸馏水洗二次，烘干。将写有菌种编号及制备膜的标签放入安瓿管内，将有字的一面向管壁，塞上棉塞，121℃灭菌1小时。
孢子悬浮液的制备
将经过摇瓶考察指标符合要求对照的斜面孢子，制成高浓度的孢子悬浮液，用无菌的毛细吸管或注射器将菌液分装于安瓿管底部，～
预冻及速冻
灌装好的安瓿管置2～5℃冰箱预冻1h，然后置-30℃温度下速冻1h后取出，置真空干燥器内。
真空干燥
将装在安瓿管的真空干燥器接入真空泵上，在-15℃温度下，抽真空6～8h。然后再在室温抽4h。
封口
将抽好的安瓿管在酒精喷灯上进行熔封（边抽真空边封口）。
安瓿管的泄漏测定
用高频火花测定仪进行测定。测定方法：将测定仪照着安瓿管管壁打一枪，如果各壁呈紫色的光即为合格，如果没有颜色，呈白光，即是不合格产品。
保藏
合格安瓿管置2～5℃冰箱保藏，保藏期为1～10年。
记录
安瓿管在保藏过程中应控制温度，每天查看温度并填写《温度、湿度原始记录》，在使用过程中应填写《安瓿管使用记录》。
砂土管的制备
砂的处理
普通黄沙用稀酸（1N的HCL或H2SO4）或稀碱（1NNaOH）浸泡12小时后,倒去酸水，用自来水充分冲洗至PH中性，烘干后用磁铁吸去铁屑，经60目筛过筛后备用。
土的处理
取离地面1公尺以下的黄土，（不含有机质）打碎，加适量水充分搅拌，将上层混浊液倒出静置（下层成块的土弃之）使土沉淀，倒出上层清液后，再加适量水搅拌，沉淀。如此反复洗涤直到PH呈中性。沉淀出来的土烘干，碾碎，经80目筛过滤后备用
砂土管的制备 方法
将处理好的沙和土按2：1(或其它比例)混合均匀，分装于10mm×100mm硬质玻璃试管中，，用新做的棉塞塞好，并外包牛皮纸，123～125℃湿热灭菌30min，间歇灭菌6次，每隔24小时一次，最后一次消好后置135～145℃烘箱干烘一小时，然后进行抽样无菌检查，每10支砂管抽1支，将沙土倒入肉汤培养基中，36～38℃培养48小时，若仍有杂菌，则需要全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。
砂土孢子的制备
斜面孢子的选择及质量标准
取经选育的单菌落制备的大试管斜面孢子或生产良好的茄氏瓶斜面孢子，具以下条件：孢子层生长丰满，较均匀，孢子数量较多，少水，孢子呈淡黄色。斜面孢子一般培养7～9天，孢子成熟。经无菌试验检查正常。发酵摇瓶试验生产能力符合要求。
生产能力试验：
原则上每批斜面孢子应作生产能力试验，尤其在大生产不正常情况下，为配合发酵工艺寻找异常原因，每批斜面应作摇瓶考察。
7-9天 11天
斜面孢子 摇瓶发酵 放瓶
指标要求： DW≥（对照）94%；TL≥（对照）94%；AA≥ 45%，指标符合要求，方可使用，并填写《摇瓶考察配制记录》和《原材料摇瓶考察》。