文档介绍：常用分子生物学技术的原理及应用
The Principle and Application mon Used Techniques in Molecular Biology
第20章
第一节
分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization and Blotting Technique
核酸分子杂交(nucleic acid hybridization)
在DNA复性过程中,如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中,或把DNA与RNA放在一起,只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系,就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex) 。
一、分子杂交与印迹技术的原理
用放射性核素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为“探针”,可用于判断待测样品中是否有同源的核酸分子存在。
(一)探针技术
(二)印迹技术
利用各种物理方法使电泳凝胶中的生物大分子转移到NC膜等各种膜上,使之成为固相化分子。这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹,因此称之为“blotting”,译为印迹技术。
分子印迹的驱动
液流驱动: DNA印迹、RNA印迹
电场驱动: 蛋白印迹
核酸印迹方法
蛋白印迹方法
二、印迹技术的类别及应用
(一)DNA印迹(Southern Blotting)
(二)RNA印迹(Northern Blotting)
(三)蛋白质的印迹(Western Blotting)
用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。
用于RNA的定性定量分析。
用于蛋白质定性定量及相互作用研究。
分子杂交实验
①
②
③
Southern印迹
放射自显影照片