文档介绍：注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定
该论文来源于网络，本站转载的论文均是优质论文，供学习和研究使用，文中立场与本网站无关，版 中圖分类号：：Adoi：.1673-
银杏叶提取物为银杏科植物银杏的干燥叶经加工制成的提取物，其主要功效为活血化瘀通络。其注射剂多用于改善微血管循环、治疗缺血性心脑血管疾病等。
银杏酸是银杏叶提取物中最主要的毒性物质，具有潜在的致敏、致突变作用和强烈的细胞毒性作用[1-2]。银杏酸是6-烷基或6-烯基水杨酸的衍生物，主要包括银杏酸C13：0、C15：0、C15：1、C17：1、C17：2，化学结构见图1。其中C13：0、C15：1、C17：1占总银杏酸的94%以上[3]。《中华人民共和国药典》2015年版[4]规定银杏叶提取物中总银杏酸含量不得过百万分之十。美国药典和欧洲药典以3种银杏酸含量之和作为总银杏酸含量[5]，规定总银杏酸含量不得过百万分之五。而注射剂作为高风险剂型，应当更加严格控制其含量。
目前，文献[6-10]多采用HPLC法测定银杏叶提取物中总银杏酸含量，但受限于该方法的灵敏度，检出限已接近百万分之十的限度，不能满足更加严格的限量控制要求。为提高灵敏度和专属性，亦有文献采用LC/MS法[11]、GC/MS法[12]、二维液相色谱法[13]等。
作者团队近年来已针对多种基质开发了UHPLC/MS/MS法测定其中总银杏酸含量（3种主要银杏酸C13：0、C15：1、C17：1总量）[14-15]。因注射用银杏叶提取物更加严格的限量控制（不得过百万分之二），且其制剂杏芎氯化钠注射液中银杏叶提取物含量极低（约110 μg/mL）、基质复杂（磷酸川芎嗪、氯化钠等辅料），目前缺乏相关研究。本文建立了UHPLC-MS/MS法解决灵敏度问题，采用的固相萃取前处理技术解决制剂纯化富集的问题。 1 仪器与试药
仪器
Agilent 1290超高效液相色谱仪;Agilent 6495三重四极杆质谱;Waters Cortecs T3色谱柱（50 mm× mm， μm）;Waters Oasis HLB固相萃取柱（规格：1 g/20 mL）。
试剂
银杏酸C13：0对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111690-200501）、银杏酸C15：1对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111762-200601），银杏酸C17：1对照品（同田生化公司，%，批号：16040916）;甲醇、乙腈、醋酸、甲酸均为色谱纯。
分析样品
10批注射用银杏叶提取物和3批杏芎氯化钠注射液均为生产企业弘和制药有限公司提供。
2 方法与结果
色谱质谱条件 采用Waters Cortecs T3色谱柱（50 mm× mm， μm），以甲醇-1%冰醋酸溶液（90∶10）为流动相，待测成分全部出峰后以甲醇-1%冰醋酸溶液（99∶1）充分清洗至少10倍柱体积;对照品溶液及提取物供试品溶液进样量1 μL，注射液进样量5 μL。
电喷雾离子化（ESI）负离子模式;干燥气（N2）流速15 L/min，温度225 ℃;雾化气（N2） MPa;鞘气（N2）流速11 L/min，温度300 ℃;毛细管电压3 000 V。采用多反应监测方式（MRM）检测，监测离子、碰撞能量等参数见表1。
对照品溶液的制备 分别取银杏酸C13：0对照品、银杏酸C15：1对照品、银杏酸C17：1对照品适量，精密称定，加甲醇制成各含50 ng/mL、20 ng/mL、10 ng/mL、5 ng/mL、1 ng/mL、0 ng/mL的系列混合溶液，作為对照品溶液。
供试品溶液的制备 1）注射用银杏叶提取物： g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，称定重量，超声（功率180 W，频率42 kHz）20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。2）杏芎氯化钠注射液：精密量取样品1 000 mL，上Waters oasis HLB固相萃取柱（规格：1 g/20 cc，预先依次用10 mL甲醇和10 mL水活化）上，用80%甲醇10 mL清洗，弃去洗液，再用甲醇20 mL洗脱，收集洗脱液并定容至25 mL，滤过，取续滤液，即得。
专属性试验 取注射液空白样品（缺银杏叶提取物）， 2）制备空白溶液，进样测定，结果空白无干扰。