文档介绍：论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名查煎日期:兰立:!:堡论文使用授权声明本人完全了解复旦大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名::壶堡!I:导师签名复旦大学博士生学位论文●中文摘要人胰腺癌b蚋f1990高肝转移细胞系的建立及中药干预研究中文摘要背景:肝转移在晚期胰腺癌中十分常见,肝转移发生率达50%以上,尚无有效的治疗手剐¨。胰腺癌肝转移是一个复杂的过程,。 Shishido嘲采用体内连续筛选法从人胰腺癌细胞株I沪C-3中成功分离并建立了高肝转移特性的人胰腺癌细胞系[伊C-3H4。这两株细胞都有中位观察时间长,转移灶数量少的缺点。国内尚无胰腺癌高肝转移细胞株报道,人胰腺癌高肝转移细胞系的建立对胰腺癌肝转移机理研究和中药抗胰腺癌肝转移的筛选意义重大. 目的:拟建立具有高肝转移特性的人胰腺癌SWl990细胞系和构建胰腺癌肝转移裸鼠模型,并采用我院常用胰腺癌治疗中药清胰化积方和华蟾素进行干预研究及了解其稳定性和可靠性. 方法:第一部分人胰腺癌SWl990高肝转移细胞系的建立采用人胰腺癌细胞株SWl990构建裸鼠脾脏移植瘤肝转移模型,连续进行6 轮肝转移筛选,取其肝转移灶建立具有高肝转移特性的人胰腺癌细胞系(Swl990m江);K8、流式细胞仪检测技术、Transwell、Pcl【、转移相关基因PCIt芯片及高通量抗体芯片等方法进行该细胞系和原代细胞SWl990之间的差异研究。第二部分中药对荷胰腺癌Sll∞O哪肝转移裸鼠模型的干预研究 ,随机分组生理盐水对照组、清胰化积方高剂量组、清胰化积方中剂量组、清胰化积方低剂量组、健择组五组, mld。 d。。。清胰化积方高、中、 mld。。和腹腔复旦大学博士生学位论文●。...。; d,一。 mld。。实验结束处死裸小鼠,解剖裸小鼠取出脾脏和肝脏,称取脾脏瘤重,计算抑瘤率;观察肝转移灶数,最后,免疫组化定量分析检测MMP-2、ⅦGF。【肝转移裸鼠模型的干预采用SWl990I-IM脾内注射建立胰腺癌肝转移裸小鼠模型,造模后次日随机分组并给药,共五组:生理盐水对照组、华蟾素509/kg组(大剂量组)、华蟾索 259/kg组(中剂量组)、(小剂量组),健择组(120ng/kg)· 。,华蟾素高、中、 d。;...·.实验结束处死裸小鼠,解剖裸小鼠取出脾脏和肝脏,称取脾脏瘤重,计算抑瘤率;观察肝转移灶数, 最后,免疫组化定量分析检测MⅦ卜2、VEG-F. 结果:(1)SWl9901埘细胞呈圆梭型,异常核分裂相多;细胞倍增时间缩短至56 小时,较源细胞(64小时)增殖速度显著加快伊<%,%显著增高伊<n舾A细胞的侵袭能力比源细胞提高伊<n删噱尽管两株细胞的成瘤率均为100%,但SWl990细胞的4周肝转移率为4096,而SWl9901埘细胞为lO碱伊<现嬲6周时,SWl990珊细胞和源细胞的肝转移灶中位数分别为36个/肝和9个/肝r,<髓蛳PCR检测显示, SWl9901埘细胞M咿一2、vBGF、bFGF和E-cadherinmllN^表达水平均高于SWl990, 只有脚,-9 mRNA表达水平低于SWl990;转移相关基因PCR芯片检测显示,有59 种转移相关基因的表达发生改变;高通量抗体芯片检测显示,有40种蛋白的表达发生改变. (2)经体内实验证实;清胰化积方高、中、%、“.87%%,清胰化积方中剂量组明显高于对照组Q<),清胰化积方抑制脾脏移植瘤生长,无剂量效应关系;清胰化积方高、中、低剂量组肝转