文档介绍：月季花药培养
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2021/1/12
花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊
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4、花的作用
被子植物的有性生殖是在花里进行的，雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分
二、被子植物花粉要因素？
材料的选择培养基的组成
植物的种类、亲本植株的生理状况、亲本生长条件、材料的低温处理、
接种密度、培养基组成、培养的环境条件等。
这是因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，在花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。
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花药培养所采用的培养基各成分中植物生长调节剂的水平和配比起决定作用。
⑴诱导愈伤组织或胚状体产生的培养基：广泛使用 2，4-D、IAA；
⑵诱导分化的培养基常除去2，4-D而以IBA代之。
亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度、培养的环境条件等对诱导的成功率都有一定的影响。
2、培养基的组成：
3、其他因素：
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花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。
为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？
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月季花药培养时的花粉粒最好是（）
A、四分体时期 B、单核居中期
C、单核靠边期 D、二核或三核花粉粒
C
2、培养基：
花药培养基所采用的培养基可能因植物的不同而有所变化小麦中为N6，马铃薯、月季中为MS，油菜中为B5培养基
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3、其他因素
亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响
六、实验操作
（一）材料的选取
②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。
①最常用的方法有醋酸洋红法
1、方法
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①醋酸洋红法染色机理
醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色。
将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。
②醋酸洋红的配置
2、醋酸洋红法
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将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。
③染色操作
3、焙花青—铬钒法
将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀
①卡诺氏固定液的配制方法
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花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。
将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。
②焙花青—铬钒溶液的配制方法
③染色操作
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（二）材料的消毒
1、酒精处理
①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。
②无菌水清洗
③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分
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2、消毒液处理
（三）接种和培养
① %的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）
② 无菌水冲洗3~5次
用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。
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在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药
②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成
立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。
1、剥取花药
①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织
2、接种
注意：
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①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。
3、培养
②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体
长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株
③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。
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在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的）
4、鉴定和筛选
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