文档介绍：微生物菌种保藏方法
菌种是一种重要的生物资源,菌种保藏是重要的微生物基础工作。菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变,以便于研究与应用。
(一)常规保藏方法
1 目的
了解菌种保藏的基本原理
掌握几种常用的菌种保藏方法。
2 原理
菌种保藏的方法很多。其原理却大同小异,不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。使微生物的代谢活动处于最低的状态,但又不至于死亡,从而达到保藏的目的。依据不同的菌种或不同的需求,应该选用不同的保藏方法。一般情况下,斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用,也比较容易制作。
3 材料

待保藏的适龄菌株斜面

肉汤蛋白胨斜面,半固体及液体培养基。
试剂
10%HCl无水***化钙、石蜡油、五氧化二磷。
器具
用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。
4 流程
斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏
5 步骤

标记试管→接种→培养→保藏

取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。

将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。

置37恒温箱中培养48小时。

斜面长好后,直接放入4℃的冰箱中保藏。这种方法一船可保藏三个月至半年。

标记试管→穿刺接种→培养→保藏
步骤

取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支,贴上标签,注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。

用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种,朝直立柱中央直刺至试管底部,然后又沿原线拉出。

置37恒温箱中培养48小时。

半固体直立柱长好以后,放入4℃的冰箱中保藏。这种方法一般可保藏半年至一年。

标记试管→接种→培养→加石蜡油→保藏
步骤

无菌操作下将5毫升石蜡油到培养好的菌种上面,加入的量以超过斜面或直立柱1厘米高为宜。
:石蜡油封存以后,同样放入4℃冰箱中保存。也可直接放在低温干燥处保藏。这种方法保藏期一般为一至二年。

流程
制沙土管→灭菌→制菌液→加样→干燥→保藏
步骤

选取过40目筛的黄砂,酸洗,再水洗至中性,烘干备用;过120目筛子的黄土备用;按1份土加4份砂的比例均匀混合后,装入小试管,装量1厘米左右。

加压蒸汽灭菌,直至检测无菌为止。

取