文档介绍：...页眉....页脚广东省高教厅重点实验室- 现代生物技术实验室实验教材基因工程技术实验指导( 研究生教材) 华南农业大学现代生物技术实验室基因工程实验分室二零零五年二月 1 编者的话本实验指导是为广东省高教厅重点实验室之一的“现代生物技术实验室”开设的“基因工程原理和方法”而编写的。本课程主要面向广州石牌地区六所高校的研究生,也包括部分高年级本科生。该课程以实验为主,为保证学生在修读本课程时有较好的理论基础, 要求所有修课学生预修“分子生物学”或“分子遗传学”。本课程实验采用了一个内容连贯的实验系统( 用质粒载体克隆植物 DNA 片段), 作为同学们掌握 DNA 体外重组基本技术的训练( 实验一至实验七)。另外, 根据本研究室多年教学、研究工作的经验,我们还把反映近年基因工程技术发展的 PCR 、 Southern 杂交技术等纳入实验内容,以保证学生修完本课程后能较快地开展相应研究工作,更好地适应未来研究工作的需要。本实验指导由庄楚雄、穆虹、易继财、姚涓、吴豪、张群宇、刘耀光、梅曼彤等老师参加编写,易继财老师负责指导书的编辑等工作。本实验指导为试用第三版,试用后我们将根据各校修课的情况和要求作进一步修改, 敬请兄弟院校的同行多提宝贵意见。编者 2005 年2月 2 目录基因工程实验室学生守则?????????????????????????????????????????? 3 实验一碱裂解法抽提质粒 DNA ?????????????????????????????????? 4 实验二琼脂糖凝胶电泳???????????????????????????????????????????? 7 实验三 DNA 的酶切?????????????????????????????????????????????? 9 实验四目的片段的回收??????????????????????????????????????????? 11 实验五 DN A 的体外连接????????????????????????????????????????? 12 实验六重组 DN A 的转化????????????????????????????????????????? 15 实验七重组转化子的快速鉴定??????????????????????????????????? 18 实验八多聚酶链式反应( PCR ) ????????????????????????????????????? 19 实验九植物 DN A 的抽提?????????????????????????????????????????? 21 实验十基因组 DN A的 Souther n 杂交分析?????????????????????????????? 24 附录 I. 各种试剂的母液配方?????????????????????????????????????????? 28 附录 II. 常用实验器具的清洗方法????????????????????????????????????? 31 主要参考书?????????????????????????????????????????????????????????? 32 3 基因工程实验室学生守则 1. 实验课前必须预****实验指导,了解实验原理和基本操作过程。 2. 实验课不得无故缺席、迟到或早退。非课表规定的实验时间, 应按任课老师的安排, 准时来进行操作。 3. 实验课时, 应自觉遵守课堂纪律, 保持实验室的安静与清洁卫生, 不得大声谈笑, 不得抽烟、随地乱丢纸屑、吐痰等。 4. 实验前清点好仪器、用具与试剂, 实验台面应随时保持整洁, 仪器、药品摆放整齐。公用试剂用毕,应立即盖严放回原处。勿使试剂、药品洒在实验台面和地面上。 5. 实验中应严格遵守操作规程进行实验, 细心观察实验现象, 并如实记录实验结果。每个实验完成后,要写实验报告。 6. 实验完毕, 应清洗好当天所用的器皿和用具, 整理好仪器与实验台面, 经任课教师同意方可离开。 7. 使用仪器、药品、试剂和各种其它物品需注意节约。洗涤和使用仪器时, 应小心仔细, 防止损坏仪器。 8. 废液可倒入水槽内, 同时放水冲走, 强酸、强碱等腐蚀性液体, 应先用水稀释后, 方可倒入水槽内,并放水冲走。废纸等其它固体废物,不得倒入水槽,应倒入废物桶内。 9. 严禁随意动用非当天实验所需使用的仪器和物品,使用仪器应严格按仪器使用的程序进行, 贵重仪器需在任课老师的指导下进行操作。实验过程中如仪器出现故障,应及时向任课老师汇报情况,如违反使用规定造成的损坏,使用者将负责修理与赔偿。 10. 每次实验课由任课教师安排学生轮流值日,值日生负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性