文档介绍：植物组织培养中的常见问题与对策
摘要: 探讨了影响植物组织培养的主要因素, 分析了污染、畸形胚、玻璃苗、褐变、黄化等产生的原因, 并提出了解决
措施。认为: 污染主要是由灭菌不彻底和环境不洁造成的, 加强外植体和培养基的灭菌, 对培养环5分钟或用5% ~ 10% 的次***酸钠浸泡25~ 30分钟。赵永辉[ 2] 等对结缕种子, 先用70%酒精浸泡, 再用5% 次***酸钠浸泡20分钟, 消毒效果较好。对于有茸毛、表面粗糙不平的材料可先用70% 的酒精浸泡, 或在消毒剂中加几滴表面活性剂吐温80, 吐温80促使灭菌液充分接触材料表面, 以达到充分消毒的目的[ 3] 。针对潜伏性污染,外植体经过消毒后, 放在不含激素和维生素的培养基中, 培养一段时间后取出再消毒。对内源细菌污
染严重的外植体, 可在培养基中加入0. 3% 的丙酸钠等杀菌剂有较好的效果。李颖[ 4] 等的研究证明,继代培养中只有真菌污染, 采用3% 的多菌灵浸泡30分钟可灭菌。任敬民等在台湾青枣的组织培养中, 先用600倍的多菌灵喷洒, 经30秒75% 酒精消毒后, 再用0. 1% 升***加几滴吐温80 消毒5分钟,既能减少污染又能促进外植体愈伤组织生长[ 5 ] 。对培养基采用微波间隙灭菌法, 微波灭菌具有成本低、效率高、处理后无污染等特点。减少培养基中的有机成分或在培养基中加入适当的青霉素、链霉素等抗生素, 可防止污染。
2􀀁畸形胚
2. 1􀀁出现畸形胚的原因
体细胞胚胎在早期发育时出现畸形, 形态和生理功能都出现异常, 不能育成苗, 或移栽不能成活的现象叫畸形胚, 如联体胚、子叶畸形胚、单极胚、多极胚、无极胚、胚轴畸形胚、重新愈伤化胚、玻璃化胚、
白化胚等[ 6 ] 。越靠近子叶片, 畸形胚分化率越高,子叶片上的不定胚几乎都是畸形胚。郑泗军等[ 7]认为染色体变异是导致畸形胚形成的原因之一。李克勤等[ 8] 在实验中研究发现, 不同陆地棉品种产生
畸形胚的频率不同, IAA、GA3含量较高的培养基和高温高湿的环境条件是畸形胚产生的原因。张宝红等[ 6] 研究发现随着培养时间的延长, 畸形胚的发生量增加。在MS+ 0. 2 mg /L IAA+ 0. 1mg /L 2, 4- D
+ 0. 1 mg /L KT培养基上, 短期培养的愈伤组织形成的体细胞胚中畸形胚的发生率为34. 4% , 而长期培养的愈伤组织形成的体细胞胚中畸形胚的发生率为93. 1%。
2. 2􀀁防控对策
在体胚发育早期, 培养基中加入适当浓度的ABA、NAA、KT, 子叶畸形胚、多极胚和其他畸形较轻的胚状体可在畸形胚的基础上长出正常芽, 逐渐发育成正常苗。当KT 使用浓度为0. 5mg /L时, 最有利于畸形胚萌发转化为正常苗, % [ 8 ] 。增加蔗糖浓度或直接干燥减少水分, 缩短胚性愈伤组织诱导培养时间, 减少种植密度, 选择通风透光条件好的培养器, 都可减少畸形胚的发生。
3􀀁玻璃苗
3. 1􀀁玻璃苗的发生
植物组织培养中, 出现试管苗含水量高, 嫩梢呈半透明状, 叶片皱缩卷曲, 植株矮小失绿, 叶表无角质层腊质, 组织结构发育畸形的现象, 这时的试管苗称为玻璃苗。玻璃苗生根困难, 移栽后不易成活, 不
能继续培养。玻璃苗多为组培过程中措施不当造成的非遗传生