文档介绍：PCR技术原理及人SRY基因扩增
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DNA的结构
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DNA的复制
模板：基因组DNA
原料：游离的核苷酸
A、G、C、T
催化剂：DNA聚合酶
需要的条件：
活细胞内的微观环境
PCR技术原理及人SRY基因扩增
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DNA的结构
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DNA的复制
模板：基因组DNA
原料：游离的核苷酸
A、G、C、T
催化剂：DNA聚合酶
需要的条件：
活细胞内的微观环境
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DNA的复制
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体内in vivo 体外in vitro
DNA的复制
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PCR技术的发明
Kary B. Mullis
Californian highway
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Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。
1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。
1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术。
1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。
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PCR技术的特点
1 ）高度的灵敏性
2 ）特异性
3 ）操作简便易行
4 ）用途广泛
30轮循环扩增量达230个拷贝（109拷贝）
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生命科学：DNA重组、转基因生物
医学工程：基因疫苗、产前诊断
疾病诊断：艾滋病、禽流感
法医学：血迹、精斑等痕迹DNA
考古学：远古人类、猛犸DNA
PCR技术的应用
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人的性别决定
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人的性别决定
Father Mother
22pairs+XY
22pairs+XX
22+X
22+Y
22+X
sperm
egg
22pairs+XX
22pairs+XY
Girl
Boy
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1959年生物学家发现Y染色体决定人（和老鼠）的男性特征;
1975年，Wachtel等提出Y染色体上有一个组织相容性抗原的基因H-Y和男性决定有关;
1987年, David Page认为Y染色体上一个特定的基因ZFY是决定男性的基因;
1988年,澳大利亚的Sinclair实验室发现袋鼠类的ZFY基因不在Y染色体上，而是在常染色体上;
1990年，澳大利亚女科学家Marshall Graves 和英国的Lovell-Badge两个实验室发现另外一个基因SRY。
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人的性别决定
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Y
SRY
男性
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利用PCR技术检测SRY基因
男性，有SRY——阳性结果
女性，无SRY——阴性结果
应用：奥运会运动员的性别鉴定
犯罪现场血痕、毛发的性别鉴定
野生动物的性别鉴定······
男 女
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总体积 25 l
Buffer 缓冲液
dNTP 原料
Primer 引物
DNA分子 模板
Taq酶 DNA聚合酶
反应体系
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移液器（pipette）
枪头（tips）
反应管（tube）
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95℃ 3min； 94℃ 30s、 52℃ 30s、 72℃ 30s
30个循环； 72℃ 延伸5min.
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核酸电泳
1. 根据欲分离DN***段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液。
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2. 放入到微波炉内加热熔化
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，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固。凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内
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，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，