文档介绍：实验1 叶绿素提取试验
实验 一 绿色植物色素的提取及分离
一、实验目的与要求
1、通过绿色植物色素的提取与分离，了解天然物质分离提纯的方法。
本原理及操作技术，加深了解微量有机物色2、学****薄层色谱和柱色谱分离的基
谱分离、法具有微量、快速、简便和高效等优点。按其操作不同，色谱可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色谱和高压液相色谱等。
1、薄层色谱(TLC)，又称薄层层析。属于固-液吸附色谱。样品在薄层板上的吸 附剂(固定相)和溶剂(流动相)间进行分离。由于吸附剂对各种化合物的吸附能力不同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。薄层层析是一种微量、快速和简单的色谱方法，用于分离、纯化和鉴定有机化合物，还可以跟踪反应进程、检验化合物纯度等。
溶质最高浓度中心至原点中心的距离 ,Rf溶剂上升前沿至原点中心的距离
2. 柱色谱:在色谱柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。液体样品从柱顶加入，当样品溶液流经吸附剂时，填装在柱中的吸附剂将混合物中各组分先从溶液中吸附到其表面上，溶剂流经吸附剂时发生无数次吸附和脱附的过程。由于各组分被吸附的程度不同，吸附强的组分移动得慢留在柱的上端(后流出)，吸附弱的组分移动得快在柱的下端(先流出)，分段接收，再分别进行鉴定，以达到分离、提纯的目的。
三、实验仪器与试剂
(1)仪器
布氏漏斗 研钵 分液漏斗 载玻片 毛细管 层析柱( 20×10 cm ) 仪器:天秤
(2)试样与试剂
新鲜菠菜、石油醚、 甲醇、乙酸乙酯 ( 化学纯) 、***、硅胶G、 无水硫酸钠、 中性氧化铝等。
四、实验步骤
1、薄层板的制备
薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果。方法:在烧杯中放入2g硅胶G，逐滴加入5,%(质量分数)羧***纤维素钠水溶液(提前配制)，调制成均匀的糊状，用玻璃棒倾注到洁净干燥的载玻片上，用食指和拇指拿住载玻片轻轻前后左右摇晃，并不时转动方向，使其表面均匀平滑，制成薄厚均匀、表面光洁平整、无气泡的薄层板，,。在室温下自然晾干(注意:室温放置必须使玻板干透，否则会出现断裂现象)，放入105,110?烘箱中进行活化30min，取出后冷却，放入干燥器中备用(提前一天铺板)。 2、菠菜色素的提取
把新鲜菠菜洗净晾干或用滤纸吸干，称取5g菠菜叶，用剪刀剪碎后放入研钵，再加入20mL甲醇搅匀，加入少量SiO，研磨5min后，用布氏漏斗抽滤菠菜2
汁，弃去滤液。将菜渣和菜叶放回研钵，用10mL石油醚-甲醇(3:2体积比)混合液萃取两次，每次需研磨充分并且抽滤。把两次滤液合并，转入分液漏斗中。用10mL水洗涤两次，以除去萃取液中的甲醇和水溶性杂质(洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化)。分液后，弃去水-甲醇层，石油醚层转入干燥的锥瓶中用无水硫酸钠干燥30min。干燥后的液体在旋转蒸发仪上蒸发石油醚浓缩至体积约2,3mL左右。取一半做柱层析分离，其余留作薄层层析分析，石油醚回收。
注意:因石油醚易挥发，抽滤时先倒少许清液浸润滤纸，抽滤时真空度不要太大。 3、薄层色谱分析
将上述浓缩液在预制的硅胶G板上点样，分别用石油醚-***(8:2体积比)混合液和石油醚-乙酸乙酯(6:4体积比)混合液两种溶剂系统展开，经过显色后，观察斑