文档介绍：第二军医大学博士学位论文蓝桉果实化学成分及质量控制研究姓名:刘玉明申请学位级别:博士专业:药物分析学指导教师:吴玉田;柴逸峰 20040501 中文摘要蓝桉为桃金娘科(Myrtaceae)桉属植物,在我国主要分布于广东、广西、云南和四川等地。蓝桉果实(俗称一口钟)在民间具有广泛的应用,主要用于治疗感冒、炎症、跌打损伤以及癌症等疾患。在本课题组前期研究过程里,已对蓝桉果实进行过初步探索,实验结果表明其中总三萜酸(FrA),在抗黑色素瘤和体外抗肝癌方面药效明确,具有很好的开发前景。本研究在对ETA进行深入研究时,又发现:蓝桉果实中化合物9,结构全新,具有很好的抗肿瘤效果:蓝桉果实富含挥发油。因此,为了开发蓝桉果实系列中药新药,本文在中药现代化思想的指导下,,对蓝桉果实的化学成分、提取工艺、药理药效及制剂制备进行了系统深入的研究。本文分为四部分,研究内容概述如下: 第一部分化学成分研究利用硅胶、大孔树脂、sephadexLH20柱层析,共分得9个化合物单体,应用理化常数测定和光谱(UV、IR、MS、1H-NMR,13C-NMR,)分析技术进行鉴定,分别为B一谷甾醇(1)、胡萝h苷(2)、豆f{5醇(3)、槲皮素(4)、山奈酸(5)、熊果酸(6)、白桦脂酸(7)、白桦脂***(8)、1-(1’一杜香醇). ,4,6-,(9)。化合物3、4、5、9为首次从该植物中提出,其中化合物(9)为结构全新的化合物。挥发油为蓝桉果实中的一类重要成分,在前期研究中利用溶剂提取法和 ,本文采用水蒸气蒸馏法对挥发油进行提取,:(Q—Pinene)、水芹烯(phellandrene)、a-松油烯(d—terpinene)、柠檬精(1imonene)、1,8-桉叶素(1,8-cineole)、(Y-terpinene)、聚花伞素(o-cymene)、蒈烯(carene)、异戊酸异戊烯酯(isovaleric acidisopentylester)、芳樟醇氧化物(1inaloloxide)、马兜铃烯(aristolene)、异喇叭茶烯(isoledene)、松油醇(terpienol-4)、石竹烯(caryophyllene)、榄香烯(elemene)、胡薄荷醇(pulegone)、长松叶烯(10ngifolene)、a·松油醇(Q .terpine01)、长松针烷(earane)、桉叶醇(eucalypt01)、醋酸香叶醇酯(acetic acid geraniolester)、香木兰烯(aromadendrene)、伞柳醇(umbellul01)、杜松醇(cadin01)、愈创木脂醇(guai01)、蓝桉醇(globul01)、桉油烯醇(spathulen01)、 Y —eudesm01)、d一桉叶油醇(a—eudesm01)、香芹酚(carvacr01)、隐陡头菌醇(ilud01)。应用氨基酸分析仪对蓝桉果实中所含氨基酸进行了鉴定和分析。蓝桉果实中至少含有17季中以上氨基酸,以天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、精氨酸等为主,含人体必需氨基酸7种。以1009干燥样品计,,().游离氨基酸含量合计为25。29mg,(%)。第二部分总三萜酸(E1A)质量标准研究前期实验研究结果表明本植物中三萜类成分含量较高,同时具有较好的药理活性,本文首次对蓝桉果实中的总三萜酸(ETA)进行了中试提取工艺的研究。在中试工艺研究中,以白桦脂***、白桦脂酸、熊果酸为定量指标,通过对乙醇浓度、乙醇体积、流速、浸泡时间等因素的筛选,建立了ETA的最佳提取流程,从丽达到符合国家中药新药报批要求,为今后的工业化奠定基础。本文首次建立了紫外分光光度法和高效液相色谱法分别对所制各ETA的总三萜酸和各活性成分进行含最测定,同时通过鉴别、检查等项目的研究对ETA进行质量监控,从而保证所提供样品的稳定性、可控性及可重复性,为今后的大生产提供质量监控手段。第三部分药理药效研究采用姐T法检测ETA对不同肿瘤细胞株体外生长的抑制作用,实验结果表明, ETA对所试肿瘤细胞株的体外生长皆具有一定的抑制作用,其中对肺癌(A549)、宫颈癌(Hela)、黑色素瘤(B16)、肝癌(HepG2,SIVNC一7721,BEL一7402,BEL一7404)、结肠癌(LS一174一T,Caco一2),胃癌(SOC一7901,AGS)、乳腺癌(MCF一7,SHZ一88, C127)、食管癌(Eta一109)和