文档介绍：免疫荧光双标记在心肌石蜡切片中的应用
陈绪军肖明第吕志前卢成宝薛松袁忠祥徐根兴
作者单位：200080上海市第一人民医院心血管外科
细胞性心肌塑型术(cellular cardiomyoplasty)用于缺血性心肌病的治疗人心肌石蜡切片加肌凝蛋白抗体而未加Cx-43抗体,PI复染 X200图4 人心肌石蜡切片均未加肌凝蛋
白抗体与Cx-43抗体，PI复染 X200
蓝色，而未加Cx-43抗体的人心肌Cx-43蛋白不着色，这表明心肌成功被标记上抗人Cx-43 抗体。图2与图4相比，加入2种抗体，人心肌纤维与Cx-43蛋白均着色，而不加抗体者均不显色；这说明本研究在人心肌石蜡切片中采用的免疫荧光双标记的方法是成功的，而且特异性高。在本研究中，标记myosin采用间接免疫荧光技术，这种方法较直接免疫荧光技术灵敏。在本研究中，两种一抗分别来源于兔与小鼠，由于二抗是多克隆的，都可以与两种一抗结合，故必须是先标记Cx-43后再标记myosin,不能将两种二抗混合在一起加入，否则会出现交叉污染。
本研究方法有以下优点：（1）特异性较单荧光标记强。在细胞性心肌塑型术中单荧光标记有一定的假阳性率，而采用本研究的双荧光法，能同时观察到
移植的人的干细胞表达两种心肌抗原，假阳性率大大减低。（2）目前，报道的人心肌免疫荧光双标记的方法较少，而且多需要特殊的设备如激光共聚焦扫描显微镜等⑵，本研究仅用普通的荧光显微镜就可以，易于掌握、使用方便。
心肌石蜡切片免疫荧光双标记的意义：成体心肌细胞再生能力非常弱⑹，移植干细胞到缺血/损伤的心肌内，以便参与心肌的修复与再生是当前国内外研究的热点E。由于不同种属来源的干细胞的分化能力有较大的差异⑻，因此，人的干细胞在运用于临床之前，还需要将人的干细胞植入动物心肌内，以观察植入的人干细胞是否分化为人的心肌细胞⑼。同新鲜冰冻切片相比，石蜡切片可以保持良好的组织形态，但在石蜡切片中运用免疫荧光检出抗原信号的灵敏性明显减低。myosin是心肌肌纤维的重要组成部分，Cx-43又称为闰盘、缝隙连接蛋白。如果观察到移植的人干细胞表达myosin与Cx-43,那么就可以认定移植的人干细胞向人心肌细胞分化，而且可以在心肌细胞的电兴奋活动中与其他心肌细胞协同收缩 ⑹。本研究建立了一种人心肌石蜡切片荧光双标记的方法，我们相信这种方法将在研究人的干细胞移植和心肌的修复与再生方面发挥重要作用。
参考文献
Chen XJ, Xiao MD. Cell transplantation for heart repair. Guowai Yixue Section of Pathophysiol Clin Med, 2003, 23： 47-49.
陈绪军，，2003, 23： 47-49.
Kehat I, Kenyagin-Karsenti D, Snir M, et al. Human embryonic stem cells can differentiate into myocytes with structural and functional properties of cardiomyocytes. J Clin Invest, 200