文档介绍：检验医学年月第卷第期,,.
文章编号:—中图分类号: 文献标识码:
茎环引物的实时荧光定量
检测表达及其临床初步应用
李莉, 林晓丹, 温旺荣
暨南大学附属第一医院临床医学检验中心,广东广州
摘要:目的建立茎环状逆转录引物简称茎环引物的实时荧光定量聚合酶链反应—
,并作初步应用。方法应用实时—检测细胞株的一,初步验证方法的
可行性。用所建立的方法对份临床宫颈刮取物标本进行检测,分析一与宫颈癌及感染的高危型人类
乳头状瘤病毒基因型别的关系,其聚合酶链反应反应产物通过电泳验证产物特异性。结果所建
方法能特异的检测到一的扩增信号,最低检出限为~/,在~ ~ /之间有良好的线
性关系,相关系数为.,扩增后惟一的熔解曲线特异峰显示很好的特异性。细胞株及例临床宫
颈刮取物标本一均显示阳性,反应产物电泳可获得单一条带。宫颈刮取物一与宫颈癌有关
.,但与本研究涉及的基因型别无关.。结论所建立的茎环引物的实时
—能快速、敏感、特异地检测细胞株和临床宫颈刮取物一的表达水平,为进一步研究一及其
临床应用奠定了基础。
关键词:微小;逆转录聚合酶链反应;一;

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微小,是一组由动最新版本的数据库://.
物、、动物和病毒的
~,他们能够与特定的目标结合,使序列已经达到种,其中人类的占种。
其降解或抑制其表达,从而导致特定基因的沉默, 许多研究表明,在一些恶性肿瘤中存在某些
对机体的各种生理和病理过程进行调节,与机体的升高或降低,并且在同一种肿瘤的不同
疾病,特别是与肿瘤或病毒感染相关¨。迄今, 发展阶段表达水平也不同,提示了
作者简介:李莉,女,年生,硕士,主要从事临床分子生物学研究。
通讯作者:温旺荣,联系电话:。
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在肿瘤基因诊断方面的作用。一是生物分光光度计公司。
最早发现的具有促癌活性的。在人各种二、方法
肿瘤类型中都发现了一的高表达,
细胞淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、。细胞培养:
等¨ 。随着对这一领域研究的不断深入,. 细胞培养于含%新生牛血清的
与疾病之问的相互关系将更趋于明朗化,最培养液中含有青/链霉素各/,,
终使其更好地应用于疾病的诊断、治疗及预后判%,,换液次,细胞生长周左右传代;
断等,而这一切都有赖于建立理想的检测方法。总提取:离心收集细胞,加入试
其中应用茎环结构逆转录引物的荧光定量聚合酶剂反复吹打裂解细胞加试剂前不必洗涤
链反应—具有较高的特异性和敏感性, 细胞,以避免的降解,之后用氯仿、异丙醇
且操作简便,更适合于临床应用。及水配制的% 的乙醇来分离和纯化
高危型人类乳头状瘤病毒的持续感,最后溶于水中,暂存于一℃
染是宫颈癌的病因。在超过% 的早期浸润性因较大片段稳定,故提取与保存采
宫颈癌中,至少发现种致癌基因型【。用上述方法,周内测定;逆转录反应:反应
有研究表明,在宫颈癌