文档介绍：兔子免疫血清和无免疫血清 成分分析比较
作者：钟园园、郑晓阳
精选ppt
目录
前言
材料、仪器设备与方法
结果分析
讨论与总结
精选ppt
前言
血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的水和各种化学成分组成,这些化学成分就包括白蛋白、α1 、α2 、β、γ- 球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶。大量实验证明将血清密封放入-10 ℃冰箱中长时间保存,由于水分和这些化学成分没有变化,因此新鲜血清和-10 ℃保存一年的血清醋酸纤维素薄膜电泳后的血清白蛋白、α1 、α2 、β、γ- 球蛋白的百分值无显著差异,两种血清的甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶也无明显差异。完全能满足实验的要求。这不仅不浪费血清,而且方便又节省实验经费）。
猪肝：由生命与环境科学学院生化试验室提供。几天前从菜市场买来置于冰箱里保鲜处理，到要用时取出（同上，冷藏对谷丙转氨酶影响不大）。
精选ppt
仪器与设备
凝胶柱及架
30℃、37℃水浴箱
定时器
微量进样器
分光光度计
透析袋
电炉
电子天平
水浴锅
离心机
精选ppt
方法
血清胆固醇的定量测定：邻苯二甲醛法
血清清蛋白与γ-球蛋白的分离与鉴定：盐析法分离提纯蛋白质、透析法脱盐与蛋白质浓缩、凝胶过滤层析、醋酸纤维素薄膜电泳法分离与鉴定血清清蛋白
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定：纸层析法、分光光度法测定血清丙转氨酶的活力
精选ppt
结果分析
图1血清总胆固醇标准曲线
精选ppt
图2 兔子血清总胆固醇含量
由图2可知免疫兔子血清中胆固醇含量比未免疫的兔子低很多
样品
吸光度
胆固醇含量/mg
不免疫兔子血清
免疫兔子血清
精选ppt
凝胶层析洗脱结果
图3 凝胶层析洗脱曲线图
由图3可知蓝色的蓝葡聚糖比黄色的***钾先流过凝胶柱，且蓝葡聚糖在第10管，即约流出197ml时,达到溶质数最大,即浓度最大；***钾在第24管，即约流出473ml时达到溶质数最大
精选ppt
全血清、清蛋白和γ-球蛋白 电泳结果
纯化的γ-球蛋白样品为一条带（γ-球蛋白位置），正常兔子血清样品为五条带（清蛋白、α1、α2、β及γ-球蛋白）
上清液的迁移距离=
γ-球蛋白的迁移距离=
全血清中：
α-球蛋白的迁移距离= β-球蛋白的迁移距离=
γ-球蛋白的迁移距离= 上清液的迁移距离 =
图4 全血清、清蛋白和γ-球蛋白电泳谱图
精选ppt
兔子血清中谷丙转氨酶的活力单位测定
图5 A520nm下酶活力单位的标准曲线
对照
未免疫兔子
4号免疫兔子
分光度
0
GPT单位（100ml）
0
由右表可知免疫兔子血清中酶活力单位比未免疫的大
精选ppt
图6 纸层析结果图
精选ppt
2．2讨论与总结
血清成分的变化能够对血液质量产生重要影响。因而对血清成分的分析具有非常重要的意义。本实验通过邻苯二甲醛法定量测定血清胆固醇的含量,血清清蛋白与γ-球蛋白的分离与鉴定,血清谷丙转氨酶活性的鉴定及活力测定,对兔子血清的成分进行分析。
精选ppt
血清胆固醇的定量测定（邻苯二甲醛法）
本实验采用邻苯二甲醛法，操作简便，即无须将样品中的胆固醇提取出来或除去样品中的蛋白质，灵敏、稳定。在实验中，应注意几个事项，如硫酸含量的高低对显色有影响，故混合酸的配制和测定过程中的加量应非常准确；加好溶液混合完毕要静置10minutes左右,使更好的混合等等。胆固醇是细胞膜的重要成分，人体内90％的胆同醇存在于细胞中，如果没有胆固醇，细胞就会死亡；胆固醇还是人体内许多重要生物活性物质的合成材料，如胆汁、性激素(如睾***、雌二醇)、肾上腺素(如皮质醇)和维生素D3等。本实验得出免疫兔子血清中胆固醇含量比未免疫的兔子低很多，原因可能是免