文档介绍：生物化学与分子生物学设计实验
（胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一脂
法测定血清尿素）
小组成员：
班级：麻醉1L2班
日期：2012年12月19
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一脂法
测定血清尿素
实验目生物化学与分子生物学设计实验
（胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一脂
法测定血清尿素）
小组成员：
班级：麻醉1L2班
日期：2012年12月19
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇及二乙酰一脂法
测定血清尿素
实验目的
1、 掌握酶法测定总胆固醇的原理和方法。
2、 学习用比色法测定血清尿素。
3、 巩固有关胆固醇和尿素的知识。
4、 进一步熟练UV2100型分光光度计的
重点、难点：
重点：1、氧化酶法测定总胆固醇的原理
2、二乙酰一月亏法测定血清尿素的注意事项 难点：氧化酶法测定总胆固醇的原理
一、 实验原理
氧化酶法测定血清总胆固醇
血清总胆固醇(TC)包括：游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)两部分。本实验是 胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化物酶相偶联发生的偶联反应。
第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸 (FFA) o
第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成A4-胆邕烯酮和H2O2o
第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生 成苯醍亚胺非那月宗的红色醍类化合物，其颜色深浅与标本中TC含 量成正比。
二乙酰一脂法测定血清尿素
二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4, 5-二甲基-2-氧咪哩化合物，颜 色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定，故由试剂中二乙酰一月亏与强酸作用 产生二乙酰。
二、 操作步骤
(一)氧化酶法测定血清总胆固醇
终点法检测TC,取试管3支按下表依次加样。
酶法测定TC操作步骤
加入物(U1)
空白管
标准管
测定管
血清
一
一
20
标准液或定值血清
一
20
一
蒸馅水
20
一
一
酶试剂
1 000
1 000
1 000
混匀后，37T保温10 min,每管加3ml水混匀，用分光光度计比色，于500 nm波长处以空白管调零，读出各管吸光度。
(二)二乙酰一脂法测定血清尿素
取试管3支，按下表依次加样。
二乙酰一月亏法操作步骤
加入物(ml)
空白管
标准管
测定管
血清
一
一
尿素标准应用液
一
一
蒸馅水
一
一
二乙酰一月亏溶液
酸性试剂
混匀，置沸水浴加热12min,取出置冷水中冷却5min,以空白管调零，在 540nm处读取各管吸光度。
三、注意事项
(-)氧化酶法测定血清总胆固醇
1、 最后加酶试剂，各管反应时间应一致；
2、 比色应在30min内完成；
3、 试管在操作前尽量保持干燥；
4、 试剂中酶的质量影响测定结果；
5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。
（二）二乙酰一脂法测定血清尿素
1、试剂中加入氨基硫月尿和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度
褪色现象，（每小时小于5%）。煮沸显色经冷却后，应及时比色。