文档介绍:腮腺炎IgG 检测试剂盒(酶联免疫法)
【产品名称】
通用名称:腮腺炎IgG检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名称:Mumps virus (Parotitis) IgG ELISA
【产品规格】
型号
无
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199缓冲液、<0. l%NaN3
洗涤液 IX 60ml
10倍浓缩,含PBS缓冲液,吐温20
底物液 IX 15ml
含TMB
终止液 IX 15ml
0. 5M 的 H2SO4
封板纸 2X
用于在温育时遮盖微孔板
自封袋 IX
用于储存不用的板条
所需材料(未提供)
1) 移液器,体积:5; 50; 100; 500 pL
2) 校准仪
3) 样品稀释用试管(1ml)
4) 带试剂储器8道移液器
5) 洗涤瓶,自动或半自动洗板机
6) 能在450nm处读数的酶标仪
7) 双蒸水或去离子水
8) 吸水纸,取样吸头和计时器
【样本要求】
血清,血浆(EDTA,肝素)
按照一般原则进行静脉采血。自样品采集到检测都 应保持血液样品的化学完整性。不要使用易溶血、 黄疸血和脂血样品。如果样品出现混浊,实验前应 将其离心以除去颗粒物质。
储存
2〜8 °C
-20°C
稳定性
2天
>2天
避免高温和太阳直射,
避免反复冻融
【检测方法】 洗涤液
20ml洗涤液用200ml双蒸水稀释,比例1:11 如有晶体,加热至
37°C以除去晶体,充分混合 2~8°C下,8周稳定。
样品稀释
血清、血浆用稀释缓冲液按1:101比例稀释
例:5ul+500ul稀释缓冲液
如果样品中IgG浓度高于最高标准品则应进一步稀 释。
检测步骤
1) 加100|iL标准品和已稀释样本于相应反应孔 中,在定性检测中只使用标准品B。
2) 封板后室温(18-25°C )温育60分钟。
3) 移去封板纸,弃去孔中液体。用300|iL洗涤液 洗板3次,在吸水纸上拍干。
4) 在每一微孔中加入lOOgL酶联物。
5) 封板后室温(18-25°C )温育30分钟。
6) 移去封板纸,弃去孔中液体。用300|iL洗涤液 洗板3次,在吸水纸上拍干。
7) 加底物液和终止液时,如果有条件的话,可使 用8孔微量移液器。确保底物液和终止液都是 相同的时间间隔加入。使用确切容积并避免气 泡产生。
8) 每孔加底物液lOOgLo
9) 室温(18-25°C )避光温育20分钟。
10) 在每一微孔中加入IOOjjL终止液以终止底物反 应。轻轻摇动微孔板以使试剂混合均匀。此时, 颜色蓝色变成黄色。
11) 加终止液后60分钟内在450nm处测OD值。
【结果计算】
在半对数坐标纸上或用自动生成的方法,以标准品 的OD值为Y轴,浓度为X轴,绘制一标准曲线图。 用立体图、4参数对数图或对数-对数图都可获得良 好的实验结果。对于标准曲线图,用标准品的每一 单值进行计算(样品结果明显异常的值必须删除掉, 应使用更加合理的单值)。样品的浓度可直接从标 准曲线上获得。一旦样品稀释了,就应当乘以相应 的稀释因子。如果样品所测得的浓度高于最高标准, 则应根据实验前的准备说明所述对样品进行稀释, 并重新检测。
典型标准曲线
标准品
U/ml
OD均值
A
1
B
10