文档介绍：抗性指标实验方法
氮蓝四n坐（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD） 1
【注意事项】 2
愈创木酚过氧化物酶（POD）活性的测定一愈创木酚法 3
【注意事项】 4
三 CAT（过氧化氢酶）的测定 5
【注意事项】 6
应液调零与其它两个则有一定差异。李合生方法：2支CK管均以缓冲液代替酶液。）
【参考文献】
Beauchamp C, Fridovich I. Superoxide dismutase. Improved assays and an
assay applicable to acrylamide gel. Anal Biochem, 1971, 44: 276-287. Zhou W, Zhao D, Lin X. Effects of water logging on nitrogen accumulation and alleviation of waterlogging damage by application of nitrogen fertilizer and mixtalol in winter rape （Brassica napes L.）. J. Plant Growth Regul, 1997,16, 47-53.
二愈创木酚过氧化物酶（POD）活性的测定…-愈创木酚法【实验原理】
在过氧化物酶催化下，序。2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470nm 处有最大光吸收，故可通过测470nm下吸光值变化测定过氧化物酶活性。
【仪器、材料与试剂】
（一）仪器
分光光度计
台式离心机
（二）材料
磷酸氢二钠
磷酸二氢钠
2-甲氧基酚
3O%H0
陶瓷小研钵
2ml离心管
（三）试剂
0. 2mol/L 磷酸缓冲液（）：
A 母液：0. 2mol/L 磷酸氢二钠溶液：取 Na2HP04 -12H20（分子量 358. 14）；
B 母液：0. 2mol/L 磷酸二氢钠溶液：取 NaH2P04 -2H20(分子量 156. 01)31. 2g。分别用蒸馅水定容到1000ml o
0. 2mol/L磷酸缓冲液(pH6. 0)的配制：分别取A母液(Na2HP04 ) 12. 3ml和B母液 (NaH2P04 ) 87 . 7ml 混匀即为 100ml PBS (0. 2M, )；
【实验步骤】
酶液提取
(可视情况调整)样品(新鲜叶片或根系)洗净后置于预冷的研钵中， ( ml、 ml、 ml) 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液()在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4°C、12000g下离心20min, 上清夜即为酶粗提液。
酶活性测定
(1)反应混合液的配制：取50mlPBS (, )缓冲液于烧杯中，加入28 U1愈创木酚(2-甲氧基酚)于磁力搅拌器上加热搅拌，直至溶解愈创木酚溶解，待溶液冷却后加入19 P 130%的氏0"混匀后保存于冰箱中备用。
(2)酶活性测定：取3ml反应液并加入40 u 1酶液后测定OD绑值在40秒的变化。以PBS代替酶液为对照调零，
计算结果
以每minOD值变化(升高)(u)。，按下式计算活性
POD 活性=(AA470XVt) / (WX Xt) (u/g FW)
AA470：为反应时间内吸光度的变化；W为样品鲜重(g)； t为反应时间(min)； Vt为提取酶液总体积(ml)； Vs为测定时取用酶液体积(ml)。
【注意事项】
反应液配制时由于愈创木酚难溶，应加热一段时间。加入压。2前注意溶液冷却，防止用。2的挥发。
由于该反应迅速，加入酶液要立即进行吸光值的测定。
参考文献
. Munoz-Munoz, F. Garcia-Molina, . Garcia-Ruiz, E. Arribas, J. Tudela, F. Garcia-Canovas, . Rodnguez-Lopez, Enzymatic and chemical oxidation of trihydroxylated phenols, Food Chemistry, Volume 113, Issue 2,15 March 2009, Pages 435-444
F. Quintanilla-Guerrero, . Duarte-Vazquez, . Garcia-Almendarez, R. Tinoco, R. Vazquez-Duhalt, C. Regalado, Polyethylene gl