噬菌斑测病毒滴度.doc

文档介绍：噬菌斑测病毒滴度
噬菌斑测病毒滴度
噬菌斑测病毒滴度
杆状病毒滴度检测
实验概要
本实验介绍了检测病毒滴度的方法。                                                
实验原理
根据噬菌斑测病毒滴度
噬菌斑测病毒滴度
噬菌斑测病毒滴度
杆状病毒滴度检测
实验概要
本实验介绍了检测病毒滴度的方法。                                                
实验原理
根据噬菌斑数计算病毒滴度。
工具/原料
1、 4% agarose gel:2g agrose   50ml 水,高压灭菌
2×Grace(unsupplemented):9、14g粉末(invitrogen) 0、07gNaHCO3 H2O,调PH6、1,定容至100ml,无菌过滤
supplemented Grace:1×Grace添加3、33mg/ml Lactalbumin,3、33mg/ml yeastolate,无菌过滤
4、 高温灭活FBS
主要设备
1、 6孔板
2、 12ml离心管
3、 100ml无菌玻璃瓶
4、 无菌吸管
5、 70℃水浴锅
实验材料
杆状病毒, SF9:5×105cells/ml
方法/步骤
1
无菌条件下,2ml/孔细胞(5×105cells/ml)种入6孔板,室温孵育1h使其贴壁,孵育后镜检其贴壁程度;
2
将4% agarose gel放入70℃水浴锅融解,空100ml无菌瓶与2×Grace放入40℃水浴锅预热;
3
将杆状病毒用无血清supplemented Grace梯度稀释:10-1~10-8。
4
弃6孔板内上清,快速加入稀释好的病毒,1ml/孔,复孔,室温孵育1h。
5
配置上层琼脂:加20ml高温灭活FBS到2×Grace 100ml,25ml 2×Grace(含FBS) 12、5ml 无菌水 12、5ml 4% agarose gel,至预热的100ml无菌瓶,轻轻混匀,放入37
噬菌斑测病毒滴度
噬菌斑测病毒滴度
噬菌斑测病毒滴度
℃水浴锅备用;
6
弃6孔板内上清,快速加2ml上层琼脂,以防菌层干燥,静置10-20min使其凝固;
7
将6孔板放入27℃培养箱,培养4－10天;
8
计数板中噬菌斑,直至连续两天无变化,加1mg/ml中性红0、5ml,室温孵育2h后计数噬菌斑。
END
注意事项
病毒滴度(pfu/ml)=1/稀释倍数×噬菌斑数×1/每孔接种体积
滴度
①某一物质与一定容量的另一物质产生反应所需的量。
②所谓滴度即病毒悬液的浓度,就就是指pfu的数值。
③滴度就是稀释度的倒数。例如上例中的 1 : 180 的稀释度,其滴度就就是 180 。
效价就是滴度的同义词。效价即滴度,两者通用。当前虽然专业的化学与免疫学词典与专著中对这些词的使用已规范化,但在不少书刊的文章中常见误用,如称效价 1 : 40 之类。
④在化学反应中,指产生某一结果所需标准试剂的量。
⑤为当量浓度的二十分之一。在制碱与制碳酸氢铵中用以表示氨水的浓度。
⑥在免疫学中,指通过血清学方法能显示一