文档介绍：收稿日期:2003?05?12基金项目:国家林业部指南项目?竹类植物遗传多样性研究和遗传连锁图谱的构建?(项目编号190)作者简介:邢新婷(1972),女,河北藁城人,博士.*本实验得到了亚热带林木培育实验室吴开云老师的指导,特致谢意!林业科学研究!2003,16(6):655~660!ForestResearch!!文章编号:1001?1498(2003)06?0655?06撑篙竹遗传变异的RAPD分析*邢新婷,傅懋毅,费学谦,姜景民(中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳!311400)摘要:采用随机扩增多态DNA(RAPD)方法对6个群体30丛撑篙竹个体进行了遗传变异的研究。28个随机引物共检测到173个位点,其中85个是多态位点,平均每个引物提供6?18个RAPD信息量,扩增出的DN***段大小一般在200~2000bp范围之间;用POPGENE1?31版软件进行遗传多样性分析:平均Nei?s基因多样性为0?2114,Shannon?s信息指数为0?3277,基因分化系数0?1853,表明群体间有一定的分化;各群体平均遗传距离0?0350,表明群体亲缘关系较近;试用UPGMA方法对不同产地的撑篙竹群体作聚类分析,初步可将6个群体聚为3类。关键词:撑篙竹;RAPD;竹类群体;遗传变异中图分类号:S795!!!文献标识码:A撑篙竹(lure)主要分布于广东、广西等地的丘陵山麓及平原河滩的疏松、肥沃沙质土壤上,海南、福建也有分布。其竹秆挺直,竹壁厚而坚韧,可作棚架、撑篙、农具、家具及建筑用材,是我国华南地区人工栽培的重要用材竹种之一。近年来,竹类植物的遗传多样性及分子系统学研究已有不少报道[1~3]。在各种DNA分子标记中,随机扩增多态性DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA,RAPD)技术可以在对物种没有任何分子生物学研究的情况下,对其DN***段进行多态性分析,因此在竹类植物群体遗传结构、多样性和系统分类、进化研究中具有独特的优势[4~10]。本文从保护生物多样性的角度,利用RAPD分子标记技术对6个产地的撑篙竹群体进行遗传多样性分析,为进一步开展撑篙竹种质资源的收集、保存、评价和利用提供科学依据。1!材料与方法1?1!样品采集供试撑篙竹取自广东增城、怀集、封开、高州和广西桂林、南宁,根据分子标记取样要求以及实验室的经验采集了6个产地30丛的叶片,每一产地5丛,每一丛各取10g新鲜嫩叶片,除去灰尘等杂物和露珠,然后密封于干燥硅胶瓶中带回实验室备用。1?2!撑篙竹DNA提取采用SDS方法提取DNA[11],并略加修改。1?3!RAPD分析试验在亚热带林木培育实验室进行。10碱基随机引物和琼脂糖均购自上海生物工程公司,反应缓冲液、Taq酶、dNTP以及标准DNA均购自上海华美生物工程公司。PCR反应在美国PE公司生产的GeneAmpPCRSystemPE9600DNA扩增仪上进行。先优化反应条件直至扩增带数清晰重复性好为止。PCR反应体系为20?L,2?L10倍反应缓冲液,模板含量为50ng,1?5mmol#L-1的Mg2+,1?2U的Taq酶,dNTP为1?0mmol#L-1,引物浓度为3?75?mol#L-1。反应程序为:94?3min%[94?1min%37?5?1min%72?1min20s]40个循环%72?