文档介绍：C6胶质瘤细胞的培养和模型的建立
姓 名：张永煌
专 业：09药物制剂
指导老师：徐维平
实****单位：安徽省立医院药剂科
研究背景与目的
实验仪器与材料
细胞培养与造模
实验结果观察
总结与讨论
目录
C6胶质瘤细胞的培养和模型的建立
姓 名：张永煌
专 业：09药物制剂
指导老师：徐维平
实****单位：安徽省立医院药剂科
研究背景与目的
实验仪器与材料
细胞培养与造模
实验结果观察
总结与讨论
目录
一、研究背景与目的
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脑胶质瘤是一类危害人类健康的颅内常见肿瘤。无论手术治疗、放疗、化疗等，疗效均不好，平均生存期仅8个月。虽然综合治疗的疗效有所提高，但预后仍不佳。为了寻找更有效的疗法，建立脑胶质瘤动物模型，为实验性治疗特别是实验性基因治疗提供有效的研究手段。
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建立简单易行、可靠稳定的大鼠脑胶质瘤模型, 为研究脑胶质瘤的发病机制及治疗方法提供操作平台。与人脑胶质瘤病理特征相似，可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。
二、实验仪器与材料
仪器：
1. MCO175型二氧化碳培养箱
2. 脑立体定向仪
3. 台式冷冻离心机
4. 倒置显微镜
5.
6. 25μL微量注射器
1. DMEM 培养基；
2. 新生小牛血清和琼脂糖；
3. 钆喷酸葡***(Gd-DTPA);
4. GFAP 蛋白抗血清和SAB 试剂盒；
5. 链霉素、抗霉素、PBS；
6. 大鼠专用线圈、常规手术器械。
材料：
三、C6胶质瘤细胞培养与造模
1. C6胶质瘤细胞的培养
细胞复苏
细胞传代
2. 脑立体定向接种C6细胞建模
注射细胞准备
注射前准备
接种方法
大鼠生存状况观测
MRI检查
病理解剖学检查
组织学检查
冻存管浸入37℃温水，融化
细胞悬液加到离心管，滴加10倍培养液
1000r/min，5min
弃上清，加小牛血清，调整细胞密度，接种培养瓶
次日更换一次培养液，继续培养
细胞图片
吸去培养基，PBS洗涤
加胰酶消化液，用枪吹打细胞
显微镜下，细胞出现明显收缩、从培养皿中脱离
加入含血清的完全细胞培养液，继续吹打下细胞
转移该培养皿中的培养液，加入新鲜
培养液，放入培养箱中培养
二、脑立体定向接种C6细胞建立模型
：
接种前取对数生长期C6细胞
％胰酶消化、收
集细胞制成细胞悬液
台盼蓝排斥试验鉴定细胞存活率大于95％
×106/ml，置于37℃恒温摇床待用。
：
前12h大鼠禁食和水，用10%水合***醛麻醉
立体定向仪固
定，常规消毒
内眦连线中点后
纵向切开头皮
1cm，暴露颅骨
、，不可伤及硬脑膜
：
微量注射器抽取25μL的C6 细胞悬液，针尖调节至触及硬脑膜
mm，后退1mm
细胞悬液注入尾状核内，推注时间为10min，注射完毕后留针10min后，缓慢退针
无菌骨蜡封闭骨孔，生理盐水冲洗术野
喷洒适量抗生素，缝合皮肤，切口消毒，常规饲养
三、术后指标的检测
：
观察、记录大鼠行为改变、体重变化与生存时间
2. MRI检查：
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水合***醛处死大鼠，生理盐水和4％多聚甲醛先后经左心室灌注, 并断头取脑, 经针眼冠状切开肿瘤及脑组织，观察形态表现。
：
HE 染色常规病理检查：
GFAP 免疫组织化学检查：
阴性对照以PBS 代替一抗
阳性对照片由试剂公司提供。
四、实验结果
第2天：19只术后未见异常；
2周后：18只出现精神萎靡、结膜充血、右侧肢体瘫痪；
3周后：继续存活的9只大鼠中8只症状进一步加重、眶周
及鼻腔周围严重充血、肢体抽搐、于25—47d死亡。
本组荷瘤大鼠生存时间为（32±2）d。
：
2 .MR影像学变化：
T1
T2
增强扫描
3. 病理解剖特征：
脑组织标本，可见肿瘤（☆示）
（HE，×100）
（HE，×200）
（HE，×100）
（HE，×400）
五、实验讨论：