文档介绍：南京林业大学硕士学位论文荧光假单胞菌毒蛋白的分离纯化与松材线虫的无异培养姓名:王维华申请学位级别:硕士专业:森林保护学指导教师:赵博光20040601摘要本研究对松材线虫携带的致病细菌荧光假单胞菌(船P“如册D力as力u"***蛋白进行了分离、纯化及对分离后蛋白组分的生物活性进行了测定;同时,对松材线虫的无异培养进行了研究,主要的研究结果如下:***原波经(NH4)2S04分级盐析及生物活性测定后得到毒性最强的组分;、,得到其中毒性最强组分的纯化蛋白;,得该纯化蛋白的大致分予量为45000。:无论是经冷冻处理失活的黑松愈伤组织还是活黑松愈伤组织,两者都能明显地促进松材线虫的产卵:黑松愈伤组织是否失活对松材线虫产卵量没有显著影响。:用经三***甲烷处理后的死荧光假单胞菌GcM5—;。4,研究表明:用死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织培养的无菌松材线虫的产卵量与用活黑松愈伤组织培养的野生松材线虫的产卵量之间没有差异,而用前者培养的无菌松材线虫的产卵量却显著多于单独用死黑松愈伤组织培养的无菌松材线虫的产卵量,说明用死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织比单独用黑松愈伤组织培养无菌松材线虫能促进松材线虫的繁殖。5,对分别用活黑松愈伤组织、死荧光假单胞菌、活荧光假单胞菌以及死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织四种介质培养的第一代和第二代无菌松材线虫雌雄成虫体长、体直径及体积进行观察测定,结果表明,无论是第一代还是第二代,用死荧光假单胞菌加死愈伤组织培养的无菌松材线虫雌雄成虫的体长、体直径和体积都明显大于用其它三种介质培养的松材线虫雌雄成虫的体长、体直径和体积,说明与其它三种介质相比,死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织能明显促进无菌松材线虫的生长发育。综上所述,本研究首次对松材线虫携带的致病细菌荧光假单胞菌(愿eu渤∞a占“ⅡD,***蛋白进行分离、纯化及生物活性测定,得到了毒性最强的纯化蛋白;经测定其分子量约为45000。本研究首次报道了用死荧光假单胞菌加死黑松愈伤组织培养无菌松材线虫的新方法;该方法比单独用黑松愈伤组织培养无菌松材线虫在线虫产卵量及生长繁殖方面更好。关键词:松材线虫;荧光假单胞菌GcM5-1A;***蛋白;黑松愈伤组织;无异培养Isolationandpurificationoftheproteinoustoxinsseeretedby,0e￡,d6历伽占州∞,Psc彻sGcM5·ultunof曰唧^e正蹦幽淞叫却^抛AbstractIs01ation,purificationandbioassaysoftheproteinoustoxinssecretedbythebactefialstram胎P“出册加s爿uD措sc朝括GcM5—1A,whichwasc删edbypinewoodnematodes,wereconductedinmispapeL111addition,llltureofB“船(p^e,Pnc^础****却^甜“:“dDmD以甜∥甜D阳scP瑚GcM5-&dconsecutivelybyS印hadexG一100gelfiltration,DEAESephadexA·50collmlnandSPSephadexC--“咒6e,∥fcallusanddeadPf胛埘腩堋6e,∥