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，供重组 DNA 的鉴定和选择。
2. 基因工程常用的载体有： 质粒 、 噬菌体 和 动、植物病毒 等。
最早应用的载体是 质粒 ，它是细菌细胞中的一种很小的双链 环状 DNA 分子。
生物 苏教版 选修三 学案 郭高宾整理
三．基因工程的基本过程
( 一 ) 获得目的基因（目的基因的获取）
1. 获取方法主要有两种：①从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。
②用人工的方法合成。
★获得原核细胞的目的基因可采取 直接分离 ，获取真核细胞的目的基因一般是 人工合成 。
★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。
2. 利用 PCR 技术扩增目的基因
（ 1） PCR的含义：是一项在生物体外复制特定 DN***段的核酸合成技术。
（ 2）目的：获取大量的目的基因
（ 3）原理： DNA 双链复制
（ 4）过程：第一步：加热至 90～ 95℃DNA 解链为单链 ；
第二步：冷却到 55～ 60℃， 引物与两条单链 DNA 结合 ；
第三步：加热至 70～ 75℃， 热稳定 DNA 聚合酶从引物起始进行互补链的合成 。
（ 5）特点：指数形式扩增
( 二 ) 制备重组 DNA分子（基因表达载体的构建）
1．重组 DNA 分子的组成：除了目的基因外，还必须有 标记基因 。
★标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有 目的基因 ，从而将 含有目的基因的细胞 筛选出来。
2．方法： 同种 限制酶分别切割载体和目的基因，再用 DNA连接酶 把两者连接。
(三 ) 转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞）
1. 转化的概念：是 目的基因 进入受体细胞内，并且在受体细胞内 维持稳定 和 表达 的过程。
2. 常用的转化方法：
① 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌 介导转化技术（ 农杆菌 转化法），其次还有 基因枪
介导转化技术（ 基因枪 法）和 花粉管通道 技术（ 花粉管通道 法）。
② 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射 技术。此方法的受体细胞多是 受精卵 。
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③ 将目的基因导入微生物细胞： Ca 处理 法。
(四 ) 筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达（目的基因的检测与鉴定）
1. 首先要检测转基因生物的染色体 DNA 上是否 插入了目的基因 ，方法是采用 DNA 分子杂交 技术。
2. 其次还要检测目的基因是否 转录出 mRNA ，方法是采用 DNA 分子杂交 技术。
3. 最后检测目的基因是否 翻译成蛋白质