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多元统计分析法评价杞菊地黄丸探讨.docx

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:1710007);编号S14~S16(C厂家,批号:161101、170401、171101);编号S17(D厂家,批号:20161101);编号S18~S20(E厂家,批号:5480072、5480074、5480075);编号S21(F厂家,批号:115495);编号S22(G厂家,批号:1704026);编号S23(H厂家,批号:1606116);编号S24(I厂家,批号:A17008);编号S25(J厂家,批号:11170926)。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:InertsilODS⁃3(4.6×250mm,5μm);流动相:乙腈(A)⁃0.3%磷酸溶液(B)梯度洗脱(0~100min,1%→35%A);流速:0.6ml·min-1;检测波长:254nm;柱温:40℃;进样量10μl。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液精密称取莫诺苷、马钱苷、丹皮酚、绿原酸、木犀草苷、3,5⁃O⁃二咖啡酰基奎宁酸、4,5⁃O⁃二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素各对照品适量,加70%的甲醇制成浓度分别为238.63,131.82,385.13,19.82,13.68,88.32,9.36,20.51μg·ml-1的对照品混合溶液作为对照品溶液。2.2.2供试品溶液取剪碎的大蜜丸约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%乙醇25ml,密封,称定重量,加热回流1h,放冷,再称定重量,用75%乙醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,既得。2.2.3单味药材供试品溶液按照样品处方和工艺,分别取适量枸杞子、菊花、熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻,按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备单味药材溶液。
2.3方法学考察
2.3.1精密度试验取杞菊地黄丸供试品(编号:S9)按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,在“2.1”色谱条件下连续测定6次,记录色谱图。结果,以马钱苷峰为参照峰,26个共有峰相对保留时间及相对峰面积RSD为分别小于0.13%和2.6%(n=6),将6次采集的色谱图导入“中药指纹图谱相似度评价系统(2012.1版本)”,以精密度1为参照图谱,6次采集的图谱与生成的对照图谱相似度均大于0.992,表明仪器精密度良好。2.3.2重复性试验取杞菊地黄丸供试品(编号:S9)按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份,在“2.1”色谱条件进行测定,记录色谱图。结果,以马钱苷峰为参照峰,26个共有峰相对保留时间及相对峰面积RSD为分别小于0.18%和3.5%(n=6),将6次采集的色谱图导入“中药指纹图谱相似度评价系统(2012.1版本)”,以重复性1为参照图谱,6次采集的图谱与生成的对照图谱相似度均为1,表明该方法重复性良好。2.3.3稳定性试验取“2.3.1”项下供试品溶液,在“2.1”色谱条件下于0,2,8,12,24h进样测定,结果,以马钱苷峰为参照峰,26个共有峰相对保留时间及相对峰面积RSD为分别小于0.58%和3.3%(n=5),将5次采集的色谱图导入“中药指纹图谱相似度评价系统(2012.1版本)”,以稳定性0h色谱图为参照图谱,4次采集的图谱与生成的对照图谱相似度均大于0.995,表明溶液在24h内稳定性良好。
2.4共有峰的归属及化学成分的指认取
“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液、单味药材供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样分析,记录色谱图,结果见图1~图3,由对照图谱共指认8个特征峰,分别为峰5莫诺苷、峰7绿原酸、峰9马钱苷、峰15木犀草苷、峰173,5⁃O⁃二咖啡酰基奎宁酸、峰184,5⁃O⁃二咖啡酰基奎宁酸、峰23木犀草素、峰26丹皮酚。由单味药材色谱图比对可知,峰1,2,5,8,9,10归属酒萸肉;峰2,3归属熟地黄;峰1,4,6,8,11,13,15,16,24,26归属牡丹皮;峰7,8,12,14,15,17,18,19,20,21,22,23,24归属菊花;峰25归属山药。
2.5指纹图谱的建立及相似度的评价
12]分别取25批供试品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,在“2.1”色谱条件进行测定,记录色谱图。采用“中药指纹图谱相似度评价系统(2012.1版本)”,以S1号样品的色谱图为参照图