文档介绍:关于代谢物识别与结构鉴定
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代谢物的结构鉴定在新药开发过程的重要地位
预防潜在的毒性
测定是否和原药具有相同的治疗作用
测定对其他治疗有内在的活性0
柱温为25 ℃,
进样量为20μL
Agilent Zorbax SBC18
(150 mm ×416 mm, 5 μm)
Agilent Zorbax SB C18
(1215 mm ×211 mm)预柱
LC-MS实例
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LC-MS实例
Metabolization pathway of G-Rd
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LC-MS实例
Fragment pathway of G-Rd
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LC-MS/MS联用技术
由于多数药物的代谢物保留了原药分子的骨架结构,或一些亚结构,因此,代谢物可能进行与原药相似的裂解,丢失一些相同的中性碎片或形成一些相同的特征离子,用MS/MS分别进行中性丢失扫描、母离子扫描以及子离子扫描,即可迅速找到可能的代谢物,并鉴定出结构。
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实例
LC-MS/MS 法快速高效检测尿液中尼古丁及其 9 种代谢物
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LC-MS/MS实例
以氘代尼古丁、氘代可的宁、3-OH-氘代可的宁、氘代尼古丁葡萄糖醛酸复合物、氘代可的宁葡萄糖醛酸复合物、3-OH-氘代可的宁葡萄糖醛酸复合物作内标, 在 LC-MS/MS 的大气压化学电离(APCI)离子化模式下, 建立了快速检测吸烟者尿液中尼古丁及其 9 种代谢物的方法, 并对 19 个实际样品进行了测试和判别分析(DA). 实验前处理简单, min.
结果表明, 尼古丁及其代谢物的精密度在 %~%之间, 回收率在94%~109%之间, 线性相关系数均大于 . DA 分析充分区别开了不同量的吸烟者, 进一步的相关性分析表明吸烟者 24 h 尿液中的尼古丁及其 9 种代谢物含量与卷烟抽吸量的分析因子之间均有较强正相关性.
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质谱检测采用APCI 源
正离子化模式
MPa
MPa
MPa
离子源温度为550 ℃
离子化电流设为3 μA
各代谢物的多反应监测(MRM)
参数见表
色谱柱
流动相
其他
质谱条件
色谱与质谱条件
流动相A 为10mmol/L 醋酸铵水溶液(pH )
流动相B 为10 mmol/L醋酸铵的甲醇溶液
mL/min
梯度洗脱条件: 起始A 为85%, min 为5%
min, min 变为85%
保持至2 min 结束
柱温为35 ℃
为Shisheido MG II 柱
( mm×50 mm, 3μm)
LC-MS/MS实例
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LC-MS/MS实例
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GC-MS联用技术
气质联用技术是分析仪器中较早实现联用技术的仪器。气相色谱分离效率高、定量准确,然而不足的是定性较为困难,及时未知样品纯度较高,鉴定结构也不容易。质谱具有灵敏度高、鉴别能力强、响应速度快的优点,但欠缺的是对复杂得多组分样品的分离能力。
虽然商品化的GC-MS联用仪器出现较早,在药物代谢研究中的应用也较早,但GC法对样品的极性和热稳定性有一定要求。因此,在GC-MS联用技术分析前,样品的预处理极为重要。其代谢物的热稳定性、挥发性、极性可能差异较大,需要根据具体情况对样品先进行水解处理或衍生化处理。
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实例
GC-MS/MS 法测定人头发中的***酚类及其代谢物
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GC-MS/MS实例
目的:建立同时检测头发中 Δ9-四氢***酚(THC)、***酚(CBN)、***二酚(CBD)和 Δ9-四氢***酸(THC-COOH)的分析方法。
方法:头发样品加入氘代内标 Δ9-四氢***酸(THC-COOH-d3),经碱水解后,以混合溶剂[V(正己烷)∶V(乙酸乙酯=9∶1]进行提取,吹干,残留物经双(三***硅烷基)三***乙酰***(BSTFA)衍生化,用 GC-MS/MS 方法进行分析。
结果 :头发中 THC-COOH、THC、CBN 和 CBD 的最低检出限分别为 4、4、10 和 20 pg·mg-1, 各化合物在 ~5ng·