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超滤管使用方法和注意事项.doc

上传人:酒酿小樱桃 2022/3/23 文件大小:25 KB

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超滤管使用方法和注意事项.doc

文档介绍

文档介绍:超滤管使用方法和注意事项
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管〔MWCO10kD〕。也有其它型号 的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩。可认为聚丙烯酰***无毒,但也 应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰***和双丙烯酰***通常含有一些金属离子,在丙烯酰*** 混合树脂〔MB-1Mallinckrodt〕,搅拌过夜,然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间,丙烯酰***和双丙烯酰***会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
  2.40%丙烯酰***
  【配制方法】把380g丙烯酰***〔DNA测序级〕和20g N,N’-亚甲双丙烯酰***溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰***溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
  【注意】见上述配制30%丙烯酰***的说明,40%丙烯酰***溶液用于DNA序列测定。
  3.放线菌素D溶液
   【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀释贮存液,用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D〔分子量为1255〕纯品在水溶液中的摩尔消化系数为 21,900,故而1mg/,放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。
  【注意】放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
  药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4.〔ATP〕溶液
  【配制方法】 ATP, ,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
5.10mol/L乙酸酰溶液
  【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
6.10%过硫酸铵溶液
  【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
7.BCIP溶液
  【配制方法】-溴-4-***-3-吲哚磷酸二钠盐〔BCIP〕溶解于10ml 100%的二***甲酰***中,保存于4℃
8.2×BES缓冲盐溶液
   【配制方法】[N,N-双〔2-羟乙基〕-2-氨基乙磺酸]、 Na2HPO4,室温下用HCl调节 、然后加入蒸馏水定容至100ml,,分装成小份,保存于 -20℃。
9.1mol/L CaCl2溶液
  【配制方法】在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2?6H2O,,分装成10ml小份贮存于-20℃。    【注意】制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器〔〕过滤除菌,然后骤冷至0℃