文档介绍：实验三间接凝集实验(1) 一、目的要求 、操作方法和基本用途 、实验原理?将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、具有一定大小的不溶性颗粒(统称为载体颗粒)的表面,然后与相应抗体(或抗原)作用, 在有电解质存在的适宜条件下,所出现的特异性凝集反应称为间接凝集反应,以此建立的检测方法称为间接凝集试验。?间接血凝试验:亦称为被动凝集试验,是将可溶性抗原致敏于红细胞表面, 用以检测相应抗体,在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集,称为正向间接凝集试验。?如将抗体致敏于红细胞表面,用以检测样本中相应抗原,致敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝集,称为反向间接凝集试验。?常用的载体有红细胞( O型人红细胞、绵羊红细胞),聚苯乙烯乳胶颗粒,其次为活性炭、白陶土、离子交换树脂、火棉胶等。间接凝集试验由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积,因此当颗粒上的抗原与微量抗体结合后,就足以出现肉眼可见的凝集反应。?将可溶性抗原或抗体吸附到载体表面的过程为致敏间接凝集试验间接血凝试验碳素凝集试验乳胶凝集试验三、实验材料? 孔110 °V型医用血凝板,与血凝板大小相同的玻板或塑料板。?( 50微升 25微升)取液塑料咀。?。?。?。?。?。?。四、操作方法? SRBC 的制备?无菌采集绵羊血,玻璃珠脱纤维抗凝,沉集绵羊红细胞用 10~20 倍体积的 PBS 洗涤 4~6 次,最终配成 10% 细胞悬液,预冷到 4℃后放于冰箱,缓慢加入等量的 1%戊二醛( PBS 配制)并继续摇动 30~60min ,然后用 PBS 洗5次,最后用 PBS 配成 10% 的悬液,加入 %NaN 3 防腐, 4℃冰箱保存备用。? SRBC 的致敏? % 醋酸缓冲液稀释抗原(最适浓度经预实验确定),置于 37℃水浴中预热。? 在5%红细胞悬液中加入等体积的抗原溶液混匀,置于 37℃水浴中作用 30min, 每隔 5min 振荡混