《免疫学实验教学课件》实验一 免疫血清的制备 2.1.ppt

文档介绍：实验一免疫血清的制备一、目的要求 1、熟悉佐剂的制备和动物免疫的常用方法 2、制备兔抗牛血清白蛋白( BSA )的免疫血清二、实验原理?免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。为制备抗体通常将适当的抗原物质注入动物体内,经过一定时间, 动物血清中可出现大量特异性抗体,这种含抗体的血清称为免疫血清。?高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等),也可供特异性免疫治疗用。三、实验材料 1. 动物: 小白鼠 8周左右体重 18克, 2-3kg 的健康雄家兔或未怀孕的雌家兔 2. 抗原:小牛血清白蛋白( BSA ) 3. 佐剂:完全福氏佐剂 ( 抗原, 羊毛脂,石蜡油,卡价苗 75mg /ml) 4. 器材:一次性注射器,碘酒酒精棉球,塑料管,镊子等四、实验的步骤与方法 1、抗原制备 1ml BSA 1ml 完全福氏佐剂搅拌(注射器交替推动) 完全乳化滴于水中经久不散抗原 1 羊毛脂 5 石蜡油 1 卡价苗 2、动物免疫?针头—使用 9# ~12# ?一次注入的剂量 ╱ kg ?接种的部位--将完全乳化的抗原注射到兔子的双后足垫和背部皮下 4-6 点,每处约 20-50ul(接种处先用碘酒、酒精消毒) ?第一次相隔 2周,以后相隔 1周,免疫 3-4 次。 3、采血和分离血清:心脏采血法①家兔仰面,四肢由助手抓住四肢固定。②剪去左胸部兔毛,消毒皮肤。③用左姆指摸到胸骨剑突处,食指及中指放在右胸处轻轻向左推,使心脏固定于左胸侧位置。然后,以左拇指触摸心脏搏动最强的部位。④用2-10 ml注射器(连接 9号针头),倾针 45°角度,对准心搏最强处刺入心脏抽血。⑤将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中或无菌离心管中,待凝固后将三角烧瓶的血置 37℃温箱 1小时,再置 4℃冰箱 3~4 小时或直接过夜。然后用毛细滴