文档介绍：.
材料和方法
实验材料
1. 研究对象
收集前列腺癌标本。选取同时期前列腺增生标本，标本均经病理科专家确诊,所有患者术前均未接受放疗、化疗或激素治疗，且各组年龄间无显著性差异。
2. 实验仪器及试剂
K主要实验仪器
电热: .
材料和方法
实验材料
1. 研究对象
收集前列腺癌标本。选取同时期前列腺增生标本，标本均经病理科专家确诊,所有患者术前均未接受放疗、化疗或激素治疗，且各组年龄间无显著性差异。
2. 实验仪器及试剂
K主要实验仪器
电热恒温水浴箱
微波炉
微量进样器
冰箱
电磁炉
电光分析天平
切片机
光学XX及XX系统
2、主要试剂
(1) HIF-la鼠抗人单克隆抗体，购于北京中杉金桥生物技术有限公司
(2) SP超敏试剂盒，购于北京中杉金桥生物技术有限公司
(3) DAB酶底物显色剂试剂盒，购于上海长岛生物技术有限公司
二、实验方法及步骤
本实验采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连接((streptavidinperoxidase,SP法，即S・P法。在一位经验丰富实验技术人员的指导下进行。具体实验过程及操作方法如下：
1. 免疫组化切片制备
将干净载玻片浸入硫酸重锯酸钾混合液中过夜，自来水冲洗后用蒸f留水反复清洗三遍，烘干；置50%的乙醇中过夜，再次用蒸f留水清洗三遍，烘干；将烘干玻片在1:50的明胶海绵中浸蘸，烘干后备用。
将石蜡包埋的组织标本连续定向切片三张，厚度4gm,1张HE染色，2张处理后用于免疫组化染色，附于处理的载玻片中央，于60C烘箱处理后备用。
2. 免疫组化SPxx染色步骤
常规SP法染色检测HIF-la按试剂盒提供的操作步骤进行：
(1) 梯度酒精常规脱蜡水化
(2) PBS)中中洗5min,共3次
(3) 微波处理修复抗原:
将切片放入有构椽酸缓中液容器中，置微波炉中加热，温度保持92-98°C,水开沸腾10分钟，自然冷却至室温；
(4) 每张切片加一滴或50u1过氧化氢阻断溶液,以阻断内源性过氧化酶的活性室温孵育10分钟；
(5) PBS)中中洗5min,共3次；
(6) 每张切片加一滴或50u1非免疫性动物血清，室温孵育10分钟；
(7) 每张切片加一滴或50u1的鼠抗人HIF・1a；
(8) 4C冰箱孵育，次日复温一小时；
(9) PBS)中中洗5min,共3次；
(10) 每张切片加一滴或50u1生物素标记的二抗，室温孵育30min;
(11) PBS冲中洗5min,共3次；
(12) 每张切片加一滴或50u1链霉素抗生物素一过氧化酶溶液，室