文档介绍：关于鸡新城疫的诊断
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掌握鸡新城疫的临床诊断和实验室诊断的方法
实训目标
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疑似鸡新城疫病死鸡、剪刀、镊子、病理剖检记录表、工作服、胶靴、围裙、橡胶手套和来苏儿等。
9～低温冰箱保存，供作进一步鉴定。
在这同时可将鸡胚倾入一平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。
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2．病毒的鉴定
（1）微量血凝试验（HA）
（2）微量血凝抑制试验（HI）
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（1）微量血凝试验（HA）
一方面判断分离病毒是否具有血凝性，另一方面确定HI试验中所用抗原的HA滴度。
①用微量移液器向反应板每个孔分别加生理盐水50μl，共加12孔。
②换一吸头吸取50μl待检病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器挤压3～5次使病毒混和均匀，然后取50μl移入第二孔，混匀后取50μl移入第3孔，依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出50μl弃去。第12孔不加病毒抗原，作对照。
③换一吸头吸取1％红细胞悬液依次加入1～12个孔中，每孔加50μl。
④加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min。并放室温（18～20℃）下作用30～40min，或置37℃恒温培养箱中作用15～30min取出，观察并判定结果。
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⑤结果判定及记录
“＋”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层，呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。
“－”表示红细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层，而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。
“±”表示部分凝集。红细胞下沉情况介于“＋”与“－”之间。
新城疫病毒液能凝集鸡的红细胞，但随着病毒液被稀释，其凝集红细胞的作用逐渐变弱。稀释到一定倍数时，就不能使红细胞出现明显的凝集，从而出现可疑或阴性结果。
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血凝试验（HA）
孔号
试剂
1
2
3
……
9
10
11
12
生理盐水
50
50
50
……
50
50
50
50
病毒液
50
50
50
……
50
50
50
1%的红细胞
50
50
50
……
50
50
50
50
振荡1min，置于室温30~40min，或置37℃温箱15~30 min
结果观察
（血凝价）
凝不凝
不凝
不滑滑
滑
弃
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HA视频
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用上述分离病毒制备4单位病毒，再用标准的阳性血清进行HI试验。
①用微量移液器向1～12号孔中分别加入50μl生理盐水。
②换一吸头取标准阳性血清50μl 置于第１孔中，挤压3～5次混匀，吸出50μl放入第二孔中，然后依次倍比稀释至第10孔，并将第10 孔的液体混匀后取50μl弃去。第11孔为病毒对照，第12孔为盐水对照。
③用微量移液器吸取稀释好的4个血凝单位的病毒抗原，向1～11孔中分别加50μl。然后，振荡1min，将反应板置室温下作用20min，或在37℃恒温培养箱中作用5～10min。
④取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入1％红细胞悬液50μl，再将反应板置于微型振荡器上振荡15～30s，混和均匀。
⑤将反应板置37℃ 温箱中作用15～30min 后取出，观察并记录结果。
（2）微量血凝抑制试验（HI）
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⑥结果判断和记录
“－”表示红细胞凝集抑制。高浓度的新城疫抗体能抑制新城疫病毒对鸡红细胞的凝集作用，使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于反应孔底端中央，而不出现血凝现象。
“＋”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释，它对病毒血凝作用的抑制减弱，反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用，而最终使红细胞完全凝集，沉于反应孔底层，边缘不整或呈锯齿状。
“±”表示不完全抑制。红细胞下沉情况介于“－”与“＋”之间。
如果待检抗体被标准阳性血清所中和，则确诊为NDV。
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血凝抑制试验（HI）
孔号
试剂
1
2
3
……
9
10
11
12
生理盐水
50
50
50
……
50
50
50
50
待检血清