文档介绍：分析化学
Analytic Chemistry
主讲:谢韵
Email: xieyunxx@
第20章
高效液相色谱法
第20章高效液相色谱法
提纲
1 高效液相色谱法谱概述
2 各类高效液相色谱法
3 固定相和流动相
4 高效液相色谱仪
5 定性与定量分析方法
§
高效液相色谱法概述
高效液相色谱法概述
高效液相色谱的特点
渊源
•在经典液相色谱和气相色谱基础上发展起来(20c 60s)
经典色谱(1906) 高效液相色谱(1967)
高效液相色谱法概述
高效液相色谱的特点
与经典液相色谱区别
HPLC:采用高压输液泵(高压),高效微粒固定相(高效),
高灵敏度检测器(高灵敏度) ,分析速度快。
经典 LC HPLC
柱子内径 1~5cm ~
长度 50~100cm 15~50cm
填充材料粒度 150µm~200µm 4µm~10µm
使用压力 1~10atm 50~200atm
分离时间 ~天~10min
高效液相色谱法概述
高效液相色谱的分类
按固定相聚集状态分
•液固色谱
正相液液色谱(NLLC)
•液液色谱
反相液液色谱(RLLC)
按机理分
•吸附色谱(AC)
•分配色谱(PC) 离子交换色谱(IEC)
•离子色谱(IC) 离子排斥色谱(ICE)
•分子排阻色谱离子对色谱(IC)
正相化合键合相色谱(NBPC)
•化学键合相色谱
反相化学键合相色谱(RBPC)
•亲和色谱(AA)
•胶束色谱(Micellar Chromatography,MC)
•手性色谱(Chiral )
高效液相色谱法概述
高效液相色谱的基本原理
塔板理论
速率理论(与GC对比)
• GC: H = A + B/u + Cu (填充柱)
或: H = B/u + Cu (毛细管柱)
A = 2λd p
Cg << Cs
B /2uDuDu= γ mg /2= γ/
d
Cu= () Cgs+ C u C = p
g 2 Cu≈ Cs u
(1+kD ) g
2
2k d f
Cs = 2
3(1+ kD ) s
高效液相色谱法概述
高效液相色谱的基本原理
速率理论(与GC对比)
DT/l ∝η()流动相黏度
• HPLC:H = A + B/u + Cu TT<<
LC GC DD<<
lg
ηηl(LC)>> g(GC)
A = 2λd p
B /2uDuDu= γ ml /2/= γ B/u 可忽略
dd22 d 2
Cu= () Cgs+ C u pp f
Cg ==δδCs =σ
DmlD Ds
H ≈ A + Cu
HPLC中,可近似认为流动相流速u与
板高H成正比
一般采用较低流速(. 1mL/min)
高效液相色谱法概述
高效液相色谱的基本原理
速率理论(与GC对比)
• HPLC与GC的H-u曲线对比
•涡流扩散项A对HPLC柱效
率的影响
开始 a
A = 2λd p
☺减小A的途径:
涡流扩散
①降低dp
-采用小粒度固定相
②降低λ a’
-采用球形、粒度分
布较窄的固定相
-采用匀浆装柱