文档介绍：关于微生物无菌操作技术
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微生物接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程。微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。
无菌技术：指在微生物实验工作中，控制或防止各，至少静止1分钟，使柜内气流稳定后再进行操作。
③安全柜内不放与本次实验无关的物品。柜内物品摆放应做到清洁区、半污染区与污染区基本分开，操作过程中物品取用方便，且三区之间无交叉。物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。
④操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。为防可能溅出的液滴，可在台面上铺一用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖住安全柜格栅。
⑤柜内操作期间，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量产生
气流，干扰柜内气流稳定；且明火可能损坏HEPA滤器。
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⑥工作时尽量减少身后人员走动以及开关房门，以防止安全柜内气流不稳定。
⑦在实验操作时，不可打开玻璃视窗，应保证操作者脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。
⑧柜内使用的物品应在消毒后再取出，以防止将病原微生物带出而污染环境。
⑨工作完全后，关闭玻璃窗，保持风机继续运转10～15分钟，同时打开紫外灯，照射30分钟。
⑩安全柜应定期进行清洁消毒，柜内台面污染物可在工作完成且紫外灯消毒后用2%的84消毒液擦拭。柜体外表面则应每天用1%的84消毒液擦拭。
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超净工作台（clean bench）与生物安全柜（Biosafety Cabinet）不同。超净工作台只能保护在工作台内操作的试剂等不受污染，并不保护工作人员，而生物安全柜是负压系统，能有效保护工作人员。
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2、无菌室的操作规则
①将所有的实验器材和用品一次性全部放入无菌室（如同时放入培养基则需用牛皮纸遮盖）。应尽量避免在操作过程中进出无菌室或传递物品。操作前先打开紫外灯照射半个小时，关闭紫外灯后，在开始工作。
②进入缓冲间后，应换好工作服、鞋、帽、戴上口罩，将手用消毒液清洗后，在进入工作间。
③操作时，严格按照无菌操作法进行操作，废物应丢入废物桶内。
④工作后应将台面收拾干净，取出培养物品及废物桶，用消毒液清洁，再打开紫外灯照射半个小时。
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3、无菌操作要求
①在操作中不应有大幅度或快速的动作；
②使用玻璃器皿应轻取轻放；
③在火焰上方操作；
④接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；
⑤在接种培养物时，协作应轻、准；
⑥不能用嘴直接吸吹吸管；
⑦带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒
桶内消毒；
⑧操作时禁止再培养物上方移动手臂；
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（2）接种
1、接种的一般流程
接种工具灭菌
接种工具冷却
沾取标本
接种
接种工具灭菌
防止污染标本
防止污染环境
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2、到平板
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3、斜面接种技术
斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。
用于好气性微生物的接种。
具体操作：
①贴标签：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等，贴在距试管口约2到3厘米处，也可使用记号笔标记。
②点燃酒精灯。
③接种：
1）手持试管
将菌种管和待接斜面的两支试管用大姆指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。
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②旋松管塞
先用右手松动试管塞，以便接种时拔出
③接种环灼烧灭菌
右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌，然
后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，
重复此操作，再灼烧一次
④拔管塞
用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种试管和待接试管的试管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)
⑤取菌
待接种环冷却后，轻沾取少量菌体或胞子，然
后将接种环移出菌种试管，注意不要使接种环
碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。
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⑥接种
在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。
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⑦塞管塞
取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将试管塞旋上。
⑧将接种环灼烧灭菌。
斜面接种示意图
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4、液体接种
具体操作：
与斜面接种基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上试管塞再轻轻摇匀。
如果