文档介绍：第4章 盐析法
知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属离子沉淀法。
重点：上述几种沉淀方法的概念、原理及其适用范围；盐析法的影响因素对沉淀效果的影响，并能根据实际情况予以灵活应用和选择。
难点：常用沉淀第4章 盐析法
知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属离子沉淀法。
重点：上述几种沉淀方法的概念、原理及其适用范围；盐析法的影响因素对沉淀效果的影响，并能根据实际情况予以灵活应用和选择。
难点：常用沉淀方法的灵活运用。
精选课件
沉淀定义
沉淀特点
应用范围
沉淀分类
1. 沉淀法概述
精选课件
盐析法
有机溶剂沉淀法
选择性变性沉淀法
等电点沉淀法
离子型聚合物沉淀法
聚电解质沉淀法
高价金属离子沉淀法
沉淀法分类
精选课件
活性蛋白
非活性蛋白
理化性质
溶解度
提取方法
蛋白质的理化性质的回顾
精选课件
盐析沉淀步骤
加沉淀剂方式
陈化条件
脱盐处理
2. 盐析沉淀
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盐析机理示意图
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精选课件
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①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降；
②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降；
③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。
盐析的机理
精选课件
Cohn方程式logS=β-KsI
Ks盐析
β盐析
二次盐析
盐析沉淀基础
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图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图
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不同蛋白质的溶解度曲线
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蛋白质的盐析分布曲线
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溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b)
精选课件
对β影响
对Ks影响
盐种类
盐浓度
温度
pH值
盐析影响因素
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无机盐种类的影响
图7 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃） (○)NaCl; (▼)KCl; (◘)MgSO4; (▲)NH4)SO4; (●)Na2SO4; (□)K2SO4; (■)柠檬酸三钠
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温度的影响
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pH对β的影响
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蛋白质起始浓度的影响
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二次盐析
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盐析操作
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3 等电点沉淀实例
①从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝，可先于pH ，除去共存的许多酸性蛋白质(pI=3．O)。工业生产胰岛素(pI＝)时，，(同时加入一定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。
②碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取：发酵液调pH ，离心收集沉淀物。用pH mol/L Tris-HCl缓冲液重新溶解，加入20～40%饱和度的硫酸铵分级，离心收集的沉淀Tris-HCl缓冲液再次沉淀，即得较纯的碱性磷酸酯酶。
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4 有机溶剂沉淀原理图
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有机溶剂沉淀实例
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mol/L磷酸氢二钠溶液，37℃水浴保温2 h，室温搅拌3 h，离心收集上清液，升温至55℃，保温20 min后迅速冷却离心去除热变性蛋白，上清液中多为热稳定性较高的醇脱氢酶。
5 选择性热变性沉淀实例
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（1）非离子型聚合物沉淀法
（2）聚电解质沉淀法
（3）金属离子沉淀法
（4）亲和沉淀
6 其他沉淀法
精选课件
凝聚技术
絮凝技术
7 凝聚和絮凝技术
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第五章 沉淀法课后练****br/>名词解释：
盐析法，有机溶剂沉淀法，选择性变性沉淀法，等电点沉淀法，盐溶，盐析，β盐析，Ks盐析，二次盐析
盐析的机理
有机溶剂沉淀的机理
二次盐析如何实现？
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