文档介绍：实验5-琥珀酸脱氢酶ALT
注意事项
注意区分肌肉与筋膜；
家兔肌肉必须充分剪碎碾磨，海砂不可加太多；
12 ml缓冲液要分次加入，不可一次性加入；
碾磨器械、纱布要及时清洗，纱布要洗干净晾干；
滴加试剂时，一定要实验5-琥珀酸脱氢酶ALT
注意事项
注意区分肌肉与筋膜；
家兔肌肉必须充分剪碎碾磨，海砂不可加太多；
12 ml缓冲液要分次加入，不可一次性加入；
碾磨器械、纱布要及时清洗，纱布要洗干净晾干；
滴加试剂时，一定要看清试剂的名称和浓度；
滴加液体石蜡时沿着管壁倾斜加入，盖住液面即可；
观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝；
实验完成后试管要用皂粉清洗。
改良Mohum法测定鼠肝谷-丙转氨酶(GPT)活性
实验 22
实验目的
掌握GPT活性测定的基本原理
熟悉GPT活性测定的具体操作方法
了解血清GPT活性测定的临床意义
实验原理
GPT
2,4-二硝基苯
丙氨酸
***酸
-***戊二酸
谷氨酸
在520nm波长测定其光密度，与已知浓度的***酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性
***酸二硝基苯（碱性溶液中呈棕色）
血清谷-丙转氨酶活性单位
在pH 、37℃条件下，
每毫升肝匀浆与底物保温30min后，
g的***酸作为
1个谷-丙转氨酶的活性单位，
血清中GPT正常值为2-40 U/mL。
实验步骤
标准管法测定酶活性：
1、取干燥试管4支，标号
测定管对照管标准管空白管
2、依次加入试剂，混匀，37℃保温
3、呈色反应后，520nm比色测OD值
谷丙转氨酶活性单位/mL鼠肝匀浆 = ? U/ml
方法一：以空白管调0，测A测定、A标准、A对照
实验结果
A测定
测定管中生成***酸的质量 = ——— × m标准
A标准
A对照
对照管中生成***酸的质量 = ——— × m标准
A标准
30min中生成***酸的质量 = m测定 – m对照
A测定-A对照
= ————— × m标准
A标准
30min生成***酸的质量 1
活性单位 = ———————————— · ——
g V测定
方法二：以空白管调0，测A'标准
以对照管调0，测A'测定
A'测定
———× m标准 1
A'标准
活性单位 = ———————— · —— (U/ml)
g V测定
注意事项
保温温度和时间要精确，即酶发挥催化作用的环境要一致。
2 掌握酶活性单位的概念和计算方法
3 微量移液器的使用
分光光度计的使用
1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min
2. 1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100”
3. ，T模式下调0%，显示“”
4. 换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度
拉杆，1-4档
样品池
读数
波长
毛面
光面
1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光线从光面通过
2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积
3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面
比色杯
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