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Mtt说明说和使用方法(共4页).docx

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Mtt说明说和使用方法(共4页).docx

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产品简介:
1. MTT细胞增殖生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解,并且必须在全部溶解并混匀后使 用。
5. 孵育时,须避光
6. MTT有致癌性,用的时候小心,,MTT对菌 很敏感。
使用说明:
1. 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边 缘孔用无菌PBS填充)。
2. 5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板,具体每孔所用的
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细胞的数目,需根据细胞的 大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,每孔0-10ul,设3-。
3. 5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。
4. 每孔加入10微升MTT染色液,继续培养4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小 心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。
5. 每孔加入100微升Formanzan溶解液,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测 仪570nm测定吸光度。如无570nm滤光片,可以使用560-600nm的滤光片。
6. 同时设置调零孔(培养基、MTT染色液、Formanzan溶解液),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介 质、培养液、MTT染色液、Formanzan溶解液)
MTT法
1、什么是MTT法? 又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
2、MTT法 - 缺点: 由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
3、 MTT法 - MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此,可以称取MTT ,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。
4、MTT法 - 注意事项 MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能