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抗原与抗体反应-免疫检测实验原理和方法.ppt

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抗原与抗体反应-免疫检测实验原理和方法.ppt

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抗原与抗体反应-免疫检测实验原理和方法.ppt

文档介绍

文档介绍:抗原与抗体反应-免疫检测实验原理和方法
另外还有其他众多的免疫检测技术和手段,其机理都利用了抗原抗体的沉淀反应。例如微量免疫电泳、对流免疫电泳、火箭电泳等。只不过其检测的对象和检测的目的各有不同。
三、补体结合试验
当抗体抗原与抗体反应-免疫检测实验原理和方法
另外还有其他众多的免疫检测技术和手段,其机理都利用了抗原抗体的沉淀反应。例如微量免疫电泳、对流免疫电泳、火箭电泳等。只不过其检测的对象和检测的目的各有不同。
三、补体结合试验
当抗体与细菌、红细胞等颗粒抗原结合并形成抗原抗体复合物后,可结合补体引起溶菌、溶血效应。用补体结合试验既可以测知患者血清中补体的总量,也可以检测未知抗原或抗体的量。
测定人血清补体总量的方法是以绵羊红血球的溶血为指示。当绵羊红血球与抗绵羊红血球结合后,加患者血清,观测溶血程度。
用于测定未知抗原/抗体时,采用两套系统,一套是待测的抗原抗体系统,称为检测系统,一套是包括绵羊红血球和抗绵羊红血球抗体的指示系统。待测系统中有无待测得抗原/抗体是利用指示系统中是否出现溶血来判断。
反应的过程是首先加待测得抗原/抗体,反应一段时间后加入补体,在反应一段时间后加指示系统。有待测抗原抗体结合时,必然结合补体,不会出现溶血,没有待测物质时出现溶血。
四、荧光抗体技术
免疫荧光法是将荧光素与特异性血清抗体以化学方式结合起来,然后将此荧光标记了的抗体作为一种试剂在特定条件下浸染标本,使与标本中相应的抗原产生结合反应,再在荧光显微镜下,以紫外光为光源进行观察。当出现荧光时,表明标记抗体存在,相应的抗原也存在。
免疫荧光法有直接法和间接法两种。
第四节 免疫亲和层析
生物高分子具有能和某种相对应的专一分子可逆结合的特性,例如酶的活性中心或别构中心能和专一的底物、抑制剂、辅助因子效应剂通过某些次级键相结合,并在一定条件下又可以解离。抗体与抗原,激素及其受体,核糖核酸与其互补的脱氧核糖核酸等体系,都具有类似的特性。这种高分子和配基之间形成专一的可解离的复合物的能力称为亲和力。根据这种具有亲和力的生物分子间可逆的结合和解离的原理发展起来的层析就称为亲和层析。
亲和层析法的基本过程:
1、偶联:将欲分离的高分子物质的配基在不影响其生物功能的情况下与水不相溶性的载体结合,制成亲和吸附剂或免疫吸附剂。
2、装柱:在层析柱内装入固相化的配基
3、亲和层析:含有高分子物质的混合液在有利于配基和高分子之间形成复合物的条件下进入装有亲和吸附剂的层析柱。高分子物质结合留在柱内,其他杂质流出。
4、洗脱:改变条件,促使配基和高分子物质分离而释放出需要的物质。
5、再生:将亲和层析柱的充分洗涤再生,用于下一周期的纯化工作。
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