文档介绍：第 1页,共 2页货号: QS2630 规格: 50管/24 样外切-β-1, 4- 葡聚糖酶( C1 )活性测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义: C1 存在于细菌、真菌和动物体内,是纤维素酶系的组份之一, C1 催化多聚糖链的末端非还原端释放出纤维二糖和葡萄糖。测定原理: 采用 3,5 -二硝基水杨酸法测定 C1催化微晶纤维素降解产生的还原糖的含量。需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制: 提取液:液体 50mL ×1瓶, 4℃保存; 试剂一:液体 15mL ×1瓶, 4℃保存; 试剂二:液体 60mL ×1瓶, 4℃保存; 样品测定的准备: 1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4 个):提取液体积(mL)为500~1000 :1的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W ,超声 3s,间隔 10s ,重复 30次); 8000g 4℃离心 10min ,取上清,置冰上待测。 2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL) 为1:5~10 的比例(建议称取约 组织, 加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。 8000g 4℃离心 10min ,取上清,置冰上待测。 3、血清(浆)样品:直接检测。测定步骤: 1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm ,蒸馏水调零。 2、加样表(在 EP管中依次加入下列试剂): 试剂名称( μL)对照管测定管样本 5050 试剂一 500 蒸馏水 500 混匀, 37℃准确水浴 2h 试剂二 1000 1000 第 2页,共 2页混匀, 90℃水浴 10min (盖紧,防止水分散失),冷却后,测 540nm 下吸光值 A ,计算Δ A=A 测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。 C1活性计算 1、标准条件下测定回归方程为 y=- ;x为标准品浓度(mg/mL ),y为吸光值。 2、血清(浆) C1活力的计算单位的定义:每 mL血清(浆)每分钟催化产生 1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。 C1活力(μg/min/mL)= [1000 ×(ΔA+) ÷ ×V反总]÷V样÷T = ×(ΔA+) 3、细胞、细菌和组织中 C1活力的计算(1)按照蛋白浓度计算单位的定义:每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1μg葡萄糖定义为一个酶活力单位。 C1活力(μg/min/mg prot)=[ [1000