文档介绍：细胞生物学实验细胞融合
概念
促融合剂与融合技术
应用与意义
重点
一 定义： Cell fusion
细胞融合：(Cell fusion)又称
体细胞杂交
（somatic hybridization）
是指将不同来等量混合。
③常用PEG的分子量通常为4000~6000，加热熔化与Eagle溶液配成50％(W／V)浓度(小分子质量的PEG配成55％浓度)。加入PEG后，24℃培育10~20min
注意时间宜短不宜长，过长，使原生质体周围包裹一层膜形成凝集体，会降低融合率)，缓缓加入高pH、高钙离子溶液15min后用冲洗液清洗，离心收集原生质体。
1981年，Scheurich和Zimmermann发明了电诱导细胞融合。
电融合槽
在直流电脉冲的诱导下，原生质体质膜表面的电荷和氧化还原电位发生改变，使异种原生质体黏合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜形成融合体。
细胞电融合
原理：
悬于大小不同的两平行电极间的低导电率溶液中的细胞，在1—100MHz和100—1000V/cm的交流电场中，会向小电极移动，并极化成偶极子，而沿电场方向发生双向电泳，此时再加上适当强度和持续时间的高压电脉冲，即可使相邻细胞膜的接触区产生可逆电降解，从而触发细胞融合。
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偶极子
电诱导法原理
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双向电泳：在交流电场的作用下（1MHz，150V/cm）细胞膜上正负电荷分离，产生偶极，两个极化的细胞会发生相互的紧密接触。
原生质体电融合过程
1）在高频电流电场下的相互接触。
2）脉冲刺激后30s
3)50秒后
4）
5）6分钟后
6）15分钟后，原生质体融合完成。
注意事项
1）对介质要求高，一般用高纯度的蒸馏水并选用适当的非电介质溶液，如甘露醇等配制等渗性介质。
2）注意控制高频交流电压和直流脉冲电压的强度和时间，以防止细胞连接成串或发生可逆性降解。
优点：
融合率高，达70％－80％，甚至100％
可在显微镜下定向诱导细胞融合
可直接挑选杂种细胞
重复性强、对原生质体伤害小；装置精巧、方便简单；免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控制性强等。
融合指数（fusion index）:
反映细胞融合的效率
有两种计算方法：
=（对照组细胞数-试验组细胞数）/试验组细胞数
=多核细胞中的细胞核数/所有细胞中的细胞核数
不同细胞融合的条件及其主要应用
来源 前处理 融合的方法 主要应用
动物细胞 不需 仙台病毒,
PEG ，电融合 生产单克隆抗体
植物细胞 脱壁 PEG,电融合 创造植物新品种
微生物细胞 脱壁 PEG, 高产优质新菌种
A
A
B
B
A
A
B
B
B
A
A
B
同核体
同核体
异核体（杂交细胞）
未融合
未融合
加入融合剂
融合细胞的类型
同核体：由同一亲本细胞融合而来
异核体： （heterokaryon）有不同亲本细胞融合而来
异核体其细胞膜融合在一起，而融合的细胞含有两个不同的细胞核。
动物细胞融合影响因素
动物细胞融合中，除促融剂外，其他如细胞性质、温度、pH、离子强度及离子种类等均全影响细胞融合效率。
①亲本细胞表面性质影响较大
②细胞种类不同，融合效果也不同，如腹水癌及株化细胞较易融合，而淋巴细胞或血球细胞几乎不融合。
③细胞融合时需要适宜温度和运动状态。
如仙台病毒诱导-腹水癌细胞融合时，于37℃ 振摇时易于融合，且融合效率与病毒量呈正比。但在34℃振摇则融合率下降。在37℃时不振摇则-不融合。
④细胞融合过程中，通常耗氧量较大，缺氧时经常不融合。空气中含氧量大于20％时有一定融合率，但有些细胞在无氧条件也可融合。
⑤有些细胞融合时需要Ca2+，否则不融合，细胞蛋白质亦发生变化。
实验表明Sr2+、Ba2+、Mg2+、Mn2+等离子可代替Ca2+，但有效浓度较Ca2+大的多。。
⑥-，在此范围之外，融合率均较低。
比较常