文档介绍：第三章液相色谱法简介

1. 高压采用高压泵使流动液能迅速通过色谱柱,一般达150×105 ~350 ×105 Pa。
2. 高速高压带来高速,分析时间一般少于lh。
3. 高效柱效能约可达3万塔板/米(GC的柱效约为2000/米)。
4. 高灵敏度由于采用了高灵敏度的检测器,最小检测量可达10-9 g,甚至10-11 g。
5. 可用于高沸点的、不能气化的、热不稳定的以及具有生理活性物质的分析
一、高效液相色谱法
二、HPLC与GC差别

GC:
适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品;
但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型
及高聚物的样品,尤其对大多数生化样品不可
检测。(占有机物的20%)

HPLC:
适于溶解后能制成溶液的样品(包括有机介质溶
液),不受样品挥发性和热稳定性的限制,对分
子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分
子和离子型样品均可检测用途广泛。(占有机物
的80%)

GC:流动相为惰性,气体组分与流动相无亲合作用
力,只与固定相有相互作用。
HPLC:流动相为液体,流动相与组分间有亲合作用
力,能提高柱的选择性、改善分离度,对分离起
正向作用。且流动相种类较多,选择余地广,改
变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用,当
选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相
也可以增大分离选择性。

GC:加温操作
HPLC:室温;高压(液体粘度大,峰展宽小)
三、 HPLC的应用 application of HPLC
1. 环境中有机氯农药残留量分析
固定相:薄壳型硅胶(37 ~50m)
流动相:正己烷
流速: mL/min
色谱柱:50cm(内径)
检测器:差示折光检测器
可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。
2. 稠环芳烃的分析
稠环芳烃多为致癌物质。
固定相:十八烷基硅烷化键合相
流动相:20%甲醇-水~100%甲醇
线性梯度淋洗,2%/min
流速:1mL/min
柱温:50 ºC
柱压:70 104 Pa
检测器:紫外检测器
第二节影响色谱峰扩展及色谱分离的因素
影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。
在高效液相色谱中, 速率方程中的分子扩散项B/U较小,可以忽略不计,而只有两项,即:
H = A + C u
故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同,如图所示:
(1)流速: cm/s时, H~u曲线是一段斜率不大的直线。降低流速,柱效提高不是很大。但在实际操作中,流量仍是一个调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。
(2) 液体的粘度比气体大一百倍,密度为气体的一千倍,故降低传质阻力是LC中提高柱效的主要途径。
由速率方程,降低固定相粒度可提高柱效。
液相色谱中,不可能通过增加柱温来改善传质。恒温
改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。