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蛋白质质谱的分析
蛋白质是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,存在于全部生物细胞,约占细胞干重质量的50%以上。随着生命科学及生物技术的快速开展,生物质谱目前已成为有机质谱中最活泼,依据质量/电荷之比来对该多肽进展分析,以判定该多肽源自哪一个蛋白。待检样品与含有在特定波长下吸光的发光团的化学基质混合,此样品混合物随即滴于一平板或载玻片上进展发挥,样品然后置于激光离子发生器。激光作用于样品混合物,使化学基质洗手光子而被激活。此激活产生的能量作用于多肽,使之由固态样品混合物变成气态。由于多肽分子倾向于汲取单一光子,故多肽离子带单一电荷。这些形成的多肽离子干脆进入飞行时间质谱分析仪。最终,由电脑软件将探测器录得的多肽质量/电荷比值数据库中不同蛋白经蛋白酶消化后所形成的特定多肽质量/电荷比值进展比拟,以鉴定该多肽源自何种蛋白,此法成为多肽质量
指纹分析。基质协助激光解吸电离/飞行时间质谱测量法操作简便,敏感度高,同时很多蛋白分别方法相匹配,而且,现有数据库中,有足够的关于多肽/电荷比值的数据,因此成为很多试验室的首选蛋白质谱鉴定方法。〔3〕电子喷雾电离质谱测量法:电子喷雾电离质谱测量法是在液态下完成,而且多肽离子带有多个电荷,由高效液相层析等方法分别的液体多肽混合物,在高压下经过一细针孔。当样本由针孔射出时。喷射成雾状的细小液滴,这些细小液滴包含多肽离子及水份等其他杂质。去除这些杂质成分后,多肽离子进入连续质量分析仪,连续质量分析仪选取某一特定质量/电荷比值的多肽离子,并以碰撞解离的方式将多肽离子碎裂成不同电离或非电离片段。随后,依质量/电荷比值对电离片段进展分析并聚集成离子谱,通过数据库检索,由这些离子谱得到该多肽的氨基酸序列,依据氨基酸序列进展的蛋白鉴定较依据多肽质量指纹进展的蛋白鉴定更精确牢靠。而且,氨基酸序列信息即可通过蛋白氨基序列数据可检索,也可通过核糖核酸数据库检索来进展蛋白鉴定。 3 蛋白质质谱分析的应用
11011年首先采纳FAB双聚焦质谱测定肽分子量,分析十一肽〔Mr=1318〕,质谱中出现准分子离子[M+1]+=1319强峰。分子量小于6kDa肽或小蛋白质和运用FAB质谱分析,更大分子量的多肽和蛋白质可用MALDI质谱或ESI质谱分析。用MALDI-TOF质谱分析蛋白质最早一列是Hillen Kramp等于11018年提出用紫红激光以烟酸为基质在TOF谱仪上测出质量数高达60Kda蛋白质,%,-%。质谱技术主要用于检测双向凝胶电泳或“双向”高效柱层析分别所得的蛋白质及酶解所得的多肽的质量,也可用于蛋白质高级构造及蛋白质间相互作用等方面的探究3条肽段的准确质量数便可鉴定蛋白质。近年来,串联质谱分析仪开展迅猛,其数据采集方面的自动化程度、检测的敏感性及效率都大大提高,大规模数据库和一些分析软件的应用使得串联质谱分析仪可以进展更大规模的测序工作。