文档介绍：微生物基本实验操作技能要领及注意事项
一、无菌操作
1、无菌概念:
什么地方是有菌的,什么地方是无菌的;
哪些地方要求基本无菌,哪些地方严格要求无菌。
2、操作环境:
实验室;接种箱;超净工作台;无菌工作室。
3、工作范围:
接种、转管、倒平板、梯度稀释、涂平板、平板划线、菌体(菌悬液)转移及其他需要无菌操作的实验环节。
一、无菌操作
4、要领及注意事项:
(以实验室接种、转管为例)
(1)斜面、接种环拿法;
(2)火焰保护;
(3)接种环灭菌;
(4)接种环冷却及轻快接触斜面;
(5)棉塞的制作及处理。
二、染色、制片
1、类型:分装片和涂片;
2、操作步骤:(以涂片为例)
1) 涂片:载玻片---滴加生理盐水---挑菌涂成
薄膜;
2)干燥:室温自然干燥:
3)固定:菌面向上,火焰上过2-3次:
4)染色:滴加染色液(美蓝),覆盖(2-3分
钟);
5)水洗:自来水冲洗,至基本无色,晾干;
6)镜检:调节光源,低倍镜观察,高倍镜观察,
油镜观察。
二、染色、制片
4、要领及注意事项:
(1)生理盐水和菌体一定不能过多;
(2)菌膜不能过厚,最好细胞分布疏密相间;
(3)固定要到位,不能残留水,也不能固定过度;
(4)染色时间正确,一定要按规定计时;
(5)水洗时,水流不宜过急;
(6)镜检前片子一定要干燥无水。
三、油镜头的使用
:
观察细菌及相近大小的微生物,真核微生物的细胞器。
2、使用特点:
一定要用油;操作要求较高。
三、油镜头的使用
3、要领及注意事项:
(1)所用装片、涂片上一定不能有水;
(2)先用低、高倍镜观察并选好视野,并将待
观察目标调至视野正中心;
(3)注意保护镜头和片子,从侧面观察镜头进
入油系;
(4)油镜头观察时,用微调调焦距,始终按
镜、片分离方向用微调调焦距;
(5)调焦距速度一定要慢,避免焦躁,因为图象
出现的焦距范围很小;
(6)注意光线的强弱;
(7)用擦镜纸蘸取溶剂(二甲苯)擦净镜头和装
片。
四、革兰氏染色
:
细菌学中最重要的鉴别染色法之一,也可用于
其他微生物的鉴别中。
一般的微生物形态观察不必用革兰氏染色。
2、基本步骤:
1)初染:结晶紫染色;
2)媒染:碘液媒染;
3)脱色:乙醇脱色;
4)复染:番红复染;
四、革兰氏染色
3、要领及注意事项:
1)菌种的菌龄,要选择生长旺盛期的典型菌体;
2)制片,按单染色的基本要求操作;
3)乙醇脱色时间是本实验成功与否的关键,注意
衬以白背景,用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为
止,约20—30秒,立即用水冲净乙醇;
4)观察时,以分散开的细菌颜色为准。
5)对未知菌进行革兰氏染色时,应选择两株形态
不同、染色结果不同的已知菌和未知菌一起混合
制片、染色。
、放线菌、酵母菌和霉菌的菌体形态的差别
(1)细菌、放线菌是原核生物,酵母菌和霉
菌是真核生物,大小不同;
(2)放线菌和霉菌是丝状菌,细菌和酵母菌
是非丝状菌;
(3)霉菌有孢子柄、子实体等特化形态,放
线菌没有。
(4)一定要注意提问,不要理解为菌落形
态。