文档介绍：?培养基的制备与消毒灭菌?实验报告
实验目的
学****和掌握配制培养基〔以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例〕的一般方
法和原理.
了解消毒和灭菌的原理,掌握常用灭菌方法的操作步骤.
实验原理

水1000ml
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实验仪器与药品
溶液或试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol／LNaOH、1mol／LHCl.
仪器或其他用具：试管、三角瓶、1000ml烧杯〔或1000ml刻度搪瓷杯〕、
量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸〔pH
〕、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等.
实验步骤
〔一〕牛肉膏蛋白胨培养基的制备．
称量〔假定配制1000ml培养基〕
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯〔或
1000ml刻度搪瓷杯〕中．牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或外表皿中称
量,,称量后直接放人水中,
这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸别离,然后立即取出纸片.
溶化
在上述烧杯中先参加少于所需要的水量〔如约700ml〕,用玻棒搅匀,然后,
在石棉网上加热使其溶解,将药品完全溶解后,补充水到所需的总体积
〔1000ml〕；如果配制固体培养基时,将称好的琼脂放人已溶的药品中,
再加热溶化,最后补足所损失的水分.
调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH,
向培养基中逐滴参加1mol/LNaOH边加边搅拌,并随时用pH试纸测其
-,用1mol/LHCl进行调节.
过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤,〔本实
验勿需过滤〕.
液体分装分装高度以试管高度的1/,一般以不超过三角瓶容积的一半为宜,如果是用于振荡培养用,那么根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后,需要补加一定量的其他无菌成分,如抗生素.
等,那么装量一定要准确.
固体分装.
分装试管,其装量不超过管高的1/5,
量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜.
半固体分装.
一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
.加塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角瓶口上塞上棉塞〔或硅胶塞、金属或
高温塑料试管帽等〕,以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染,并保证有良好的通气性能〔棉塞制作方法附本实验后面〕.
.包扎
加塞后,将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,
以预防灭菌时冷凝水润湿棉塞,、,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、配制日期.
.灭菌
,121C,20min高压蒸气灭菌.
.摆斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右〔以防斜面上冷凝水太多〕,将试管口端
搁在玻棒或其他适宜高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的
一半为宜
.无菌检查
．-48h℃的恒温箱中培养37