文档介绍：微生物检验实验室基本要求知识点
微生物检验实验室基本要求知识点
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微生物检验实验室基本要求知识点
病毒是一类体积微小、结构简单、具有严格的寄生于活细胞的微小生物，它们具有下列几种基本特征：
1、病毒的基本结构是由核酸（
（5）在核糖体上，有两个位置上暴露出（直接决定蛋白质的结构）分子相邻的两个密码子，当蛋白质合成进行到没有携带任何一种氨基酸（具有搬运功能）与其对应，这说明合成蛋白质结束，并已开始同一种蛋白质
分子的合成。
（6）合成蛋白质后，决定其空间结构的是蛋白质的氨基酸排列顺序确定后，就能自动折叠卷曲成一定的空间形状。
（7）在原核生物核糖体是由16 、23 、5 组成，在真核生物核糖体的五种主要的组蛋白中，H1在进化中最不保守。
基因表达调空：
（1）***霉素可与核糖体50S亚基结合并抑制蛋白质合成。
（2）在基因5，上游基因内或其3，下游序列中存在，能提高同一条链上靶基因转录速率的遗传控制元件是增强子。
（3）乳糖操纵（）子中结构基因是、、。
遗传重组：
转座子的功能有
（1）促进染色体重排
（2）促进基因重复
（3）促进基因扩增
（4）造成缺失突变
在大肠遗传重组中，同源重组需蛋白质。
一、核酸提取、纯化、浓缩
-***仿抽提。
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。
，要避免用乙酸钾。
，应用酚-***仿抽提。
，最明显优点是可减少溶液体积。
1、质粒提取：在用碱裂解法少量提取质粒时，在缓冲液（Ⅰ液）中不含。多数质粒在自然状态下是环状链。
质粒纯化方法有：
①离子交换分析；
②聚乙二醇分级沉淀；
③二凝胶过滤层析；
④***化铯（）- 溴化乙锭梯度平衡离心。
质粒具备有复制起点、抗生素抗性基因、有多种限制酶的单一切点、有较高的拷贝数。
2、凝胶电泳：要使大于2的片段在凝胶电泳中分辨率达最大，其电压不应超过5。
在电泳中不同构象泳动率通常是：超螺旋＞线性＞切口环状。
二、扩增技术：
反应中变性、延伸温度通常是：95℃、72℃。引物的值估算每个A或T加2℃。
在反应中每一种的浓度通常是200，在反应中经n次循环后理论上，链的扩增数目是2n倍。
在反应中引物只与靶序列的相应部分结合的说法是错误的。
再此（扩增技术）反应中矿物油不是必需的，用于扩增未知序列的是反向。
不对称法专用于制备单链的扩增。
在反应碱基错配率较高，原因是聚合酶缺乏3' - 5，外切酶活性。
反应中的引物是。反应体系中酶过多与引物过多都可引起非靶序列扩增。
三、寡核苷酸探针合成、放射标记、杂交
标记合成寡核苷酸时的浓度不应低于1。
探针是一段带标记的单链，双链，，单链。
杂交液的成分与杂交温度间的关系正确的是甲酰***42℃，水68℃。
标记探针的最有效简单方法是体外转录法。
标记双链的3，端时，常用T4噬菌体聚合酶，而不是大肠菌聚合酶Ⅰ片段，主要是因为3'- 5，外切酶活性高。
所用探针一般是。一般是用于分子的杂交技术。
在核酸分子杂交技术基础之上又发展了一系列检测和的技术，
如、、和菌落杂交。
大肠菌的聚合酶Ⅰ用在切口平移法标记。在20℃～25℃下探针与靶序列退火速率最大，比解链温度低情况下进行杂交。
将外源性质粒导入细菌中称为转化。外源性重组质粒与感受态细菌混在一起，一般在42℃作短暂的热刺激。基因克隆以为模板。
四、基因克隆载体：
柯()斯质粒载体具有噬菌体特性，能通过溶菌周期，形成子代噬菌体颗粒的说法是不对的。
五、序列测定：
与双脱氧链终止测序法相比，法所测序列为原分子，这是其特点。
六、克隆子定点诱变：
噬菌体转座成分不含末端反向重复序列。
改变蛋白质密码序列的个别密码子最好采用寡核苷酸介导诱变。
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七、研究与蛋白质的方法：
（1）凝胶阻滞试验
（2）足迹试验
（3）***化干扰试验
（4）体内足迹试验都是研究与蛋白质作用的方法。
病毒是一类体积微小、结构简单、具有严格的寄生于活细胞的微小生物，它们具有下列几种基本特征：
1、病毒的基本结构是由核酸（基因组）与蛋白质组成，由或组成核心，外有一蛋白外壳（核壳），有些病毒在核壳外面另有一层脂蛋白组成的包膜包围着。
2、病毒只在活细胞中增殖，因为病毒缺乏完整细胞器等必要装置，所以必