文档介绍：第二十一章
淋巴细胞标志和功能的检测
何印蕾
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概述
人体内的淋巴细胞分为T细胞、B细胞和包括NK细胞为代表的第三群细胞。淋巴细胞及其亚群的检测是判断机体细胞免疫水平的重要指标。
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第一节　T细胞表面标志
（4）因被吞饮入胞质而膜上无荧光着色。
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这些现象的出现是由于淋巴细胞膜由双层类脂组成，上嵌有蛋白分子，在体温条件下膜呈半液体状，镶嵌物能在其中移动。当SmIg抗体发生结合时，由于抗血清为双价，使SmIg出现交联现象，这种抗原抗体复合物可连成斑点状和帽状，时间一长，帽状结合物可脱落或被吞饮而消失。因此染色后必须在30min进行观察。
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2、 Fc受体的检测
　　B细胞表面的IgG Fc受体段结合的受体，极易与抗原抗体复合物中的抗体Fc段牢固结合，故用相就抗体致敏的红细胞作指示物，在一定条件下形成EA花环。即：致敏的红细胞（EA）+LC →B细胞的Fc受体与EA结合→形成EA花环。
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3、补体受体的检测
　　BC表面的补体受体能与红细胞（E）－抗红细胞抗体（A）－补体复合物（EAC）中的补体结合→形成EAC花环。
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二、小鼠红细胞受体的检测
　　部分B细胞能与小鼠红细胞形成花环，慢性B细胞白血病患者外周血中的LC形成小鼠红细胞花环率高达60%~80%，而正常人为5%~10%,据此可用于鉴别不同类型淋巴细胞白血病。
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第四节　　B细胞功能的检测
一、体内试验
　　B细胞受抗原或促有丝分裂原刺激后，可分裂增殖并分化成熟为抗体生成细胞，分泌相应的Ig。如果B细胞功能减低，那么，体内免疫球蛋白的含量将会下降，因此，检测血清中免疫球蛋白（Ig)的含量，可判断B细胞功能，也是诊断体液免疫缺陷的主要指标。
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二、溶血空斑形成试验
（一）原理：用SRBC免疫小鼠→取脾（B细胞）→加入SRBC和补体→ 混合于琼脂溶液中制成平皿→ 置于37℃温育→形成SRBC－抗SRBC抗体－补体复合物→导致SRBC溶解→形成溶血空斑。
　　每一个空斑表示一个抗体生成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
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（二）溶血空斑形成试验的类型
1、直接溶血空斑试验＿＿用于检测IgM型抗体
2、间接溶血空斑试验　
　　由于IgG、 IgA等类型抗体溶血效率较低，因此不能用直接检测，可用间接法测定，即用SRBC免疫小鼠→取脾（B细胞）→加入SRBC、补体和抗小鼠抗体→ 混合于琼脂溶液中制成平皿→ 置于37℃温育→形成SRBC－抗SRBC抗体－抗小鼠抗体－补体复合物→导致SRBC溶解→形成溶血空斑。
　　用于检测IgG、 IgA型抗体
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3、被动溶血空斑试验
　　由于直接和间接空斑试验只能检测抗红细胞抗体的产生细胞，而且需事先免疫动物，难以检测人类的抗体产生情况。如果将SRBC用其它抗原包被，即可检测与该抗原相应的抗体产生细胞，这种非红细胞抗体性溶血空斑试验称为被动空斑形成试验。常用SPA－SRBC溶血空斑试验。因为SPA能与人体内IgG的Fc段结合。
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4、反相空斑形成试验
　　是用抗IgG、IgA、IgM抗体包被SRBC，检测相应的免疫球蛋白的产生的细胞。
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三、B细胞增殖能力的试验
－－刺激物诱发增殖试验
抗IgM和细菌脂多糖均能刺激B细胞增殖，培养1~3天后，加入3H－TdR，检测细胞内cpm值，计算刺激指数。或用显微镜检查。
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第五节　自然杀伤细胞（NK）的检测
1、形态法
　　将效应细胞与靶细胞按一定比例混合温育→台盼蓝染色→分别计数死亡细胞和活细胞数→计算NK细胞的杀伤性。
2、酶释法
　　将效应细胞与靶细胞按一定比例混合温育→离心沉淀→取上清液检测靶细胞遭破坏后释放的乳酸脱氢酶或碱性磷酸酶的含量。
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3、荧光法
　　用荧光素标记靶细胞，与效应细胞温育→离心去上清→荧光显微镜检查剩余的活细胞的荧光。
缺点：活细胞释放的荧光容易被效应细胞等所粹灭，非特异性荧干扰较大，荧光本底强。而时间分辨荧光免疫测定，将靶细胞用镧系元素铕（Eu）作荧光标记，用时间分辨荧光仪进行检测，可消除非特异性荧光本底，且特异性强。
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4、同位素法
　　将效应细胞和靶细胞按一定比例混合温育直接检测靶细胞。分有胞浆释放法和胞核释放法。
5、化学发光
　　当效应细胞与靶细胞接触时，效应细胞呼吸爆发，生成极不稳定的O2－和OH－等，放出光子，在发光剂存在的条件下，可被光电倍增管接受和计数，发光量与NK细胞杀伤能力相关。
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总之，细胞功能检测的方法多种多样，各方法检测的敏感性和特异性也相差悬殊，一般要根据实际情况和条件选择适合自已的实验方法。
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第六节　免疫细胞