文档介绍：实验方案
样品制备（Sample preparation）

高速离心机

NS（制备好的）；Citrated human plasma ；溶解缓冲液(9M 尿素，4 ％ CHAPS，2 ％ IPG 缓冲液，4 SDS)
3).溴酚蓝溶液: % (w/v) 溴酚蓝溶于分离胶缓冲液中

.使用前每 10ml 平衡缓冲液中加入 DTT(相当于平衡缓冲液 I)，根据表3 加入适量平衡缓冲液 I 和溴酚蓝溶液。取出 IPG 胶条分别放入玻璃管中(每个玻璃管中放入一条 IPG 胶条)，用 Parafilm 封口，在振荡仪上振荡 15分钟，倒掉平衡缓冲液 I。
.(相当于平衡缓冲液II)。根据表3加入适量平衡缓冲液II和溴酚蓝溶液。用 Parafilm 封口，在振荡仪上振荡15分钟，倒掉平衡缓冲液II。
3).用去离子水润洗 IPG 胶条一秒钟后，将胶条的边缘置于滤纸上几分钟，以去
除多余的平衡缓冲液。
表3 IPG胶条平衡液用量
胶条长度（cm）
建议平衡液体积（ml）/条
溴酚蓝溶液（ul）
7
-5
-25
11
5-10
25-50
13
5-10
25-50
18
10
50
24
15
70
SDS 电泳（SDS-PAGE）

电泳槽

1). 丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液（ % T， % C）
过滤后可于 4°C 储存两周内使用。
2). 分离胶缓冲液（ M Tris-HCl, pH 和 %（w/v）SDS）
此溶液可于 4°C 储存两周内使用。
. 10 %（w/v）过硫酸铵溶液（此溶液需使用前新鲜配制）。
4). 覆盖液（缓冲液饱和的正丁醇）：
5). 取代液（50 % v/v 甘油和 % 溴酚蓝水溶液）
6). 低熔点琼脂糖溶液：含有 % (w/v) 低熔点琼脂糖的电极缓冲液。
7）TEMED
：
根据第一向 IEF 电泳时 IPG 胶条的大小选择第二向合适的垂直电泳槽。
1).按仪器说明书装好灌胶模具，倒入凝胶溶液（在 Hofer DALT 和 Ettan DALT
II 的灌胶模具中，拔掉灌胶的胶管后，取代液会把管道中剩余的凝胶溶液压入模具中）。在每块胶面上加覆盖液以保持凝胶上样面平整。
2).同时灌制多块凝胶时，室温下至少要聚合 3 小时。
3).暂时不需要的凝胶可用塑料薄膜包裹于 4°C 保存，2 天内使用。
：
1).电泳槽中装满电泳缓冲液，并打开温控系统，设置温度为 15℃。
2).将平衡好的 IPG 胶条浸入电极缓冲液中几秒钟。
3).将 IPG 胶条小心的放置于 SDS 胶面上，并轻压使 IPG 胶条与 SDS 胶面充分接触，然后在胶面上覆盖 2 ml 琼脂糖溶液(75 ℃左右)，使琼脂糖在 5 分钟内凝固。
4).垂直 SDS gels (13 % T, % C, 大小 250 x 200 x 1 mm3) 运行条件
5). 当溴酚蓝染料迁移到胶的底部边缘即可结束电泳