文档介绍：主讲内容
实验室的设计和基本操作技术
培养基及其配制
第一页，共八十九页。
第一部分
实验室的设计
第二页，共八十九页。
细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：
实验准备（培养基配制，洗涤
第二十七页，共八十九页。
细胞工程实验室基本设备配制小结
基本设备：冰箱、天平、酸度计
灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
无菌操作设备：净化工作台、接种箱
第二十八页，共八十九页。
光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备：培养设备根据需要而定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。
细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜
第二十九页，共八十九页。
第二部分 基本操作技术
基本操作技术主要是围绕无菌操作技术展开的一系列操作技能，内容主要包括：
一．洗涤技术
二．灭菌、消毒技术
三、接种技术
第三十页，共八十九页。
一、 洗涤技术
、洗涤目的：去除杂物，降低带菌量
、根据洗涤对象的不同，主要分为：
器皿洗涤（包括玻璃、塑料、搪瓷、
不锈钢器皿）
培养材料洗涤
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（一）器皿洗涤
根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种：
特殊洗涤
微生物大量污染的洗涤
常规洗涤
第三十二页，共八十九页。
常规洗涤
△ 自来水洗去油渍、霉菌等脏物；
△ 温肥皂水中浸泡一定时间后用刷子刷净；
△自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；
△ 蒸馏水淋洗内外壁
△ 将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（50～75℃）
△ 放入除尘柜中备用
第三十三页，共八十九页。
微生物大量污染的洗涤
△ 微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤
特殊洗涤（如沾有蛋白质类物质或其它有机物时)
△ 经过常规洗涤未过蒸馏水的器具，浸泡入洗液（铬酸洗涤液是用***钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成）中数分至数小时；
△ 回收洗液，器具先用自来水洗净，蒸馏水淋洗，烘干（75℃）
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（二）、试验材料的清洗
清洗目的：来自自然界的试验材料，包括来自土壤中的幼茎、磷茎，滋生着各种微生物，尤其是细菌的芽孢和真菌的孢子，一旦与培养基接触，就会很快的繁殖起来，造成培养基和培养材料的污染。
清洗方法：先用自来水冲洗5分钟，然后用中性洗涤剂清洗，注意勿损伤试验材料。再用自来水流水冲洗半小时，用于下一步的药剂灭菌。
第三十五页，共八十九页。
二、灭菌、消毒技术
（一）关于有菌和无菌的概念
有菌的范畴：
凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的，如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。
第三十六页，共八十九页。
高压高温处理（工具、器皿、培养基等）
物理或化学处理；
火烤后的物体；
健康的动植物不与内外部表面接触的组织
内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但
不会影响培养，也不会污染）
无菌的范畴：
第三十七页，共八十九页。
（二）灭菌、消毒技术作用和意义
植物组培中，凡用于培养和无菌操作的房间、器具、培养瓶、培养基，培养材料和操作者的衣物和手都应随时进行灭菌，以确保不受杂菌污染，否则，由于杂菌的生长繁殖速度一般都比培养的组织快得多，最终将把组织全部杀死，这些污染微生物还可能排泄对植物组织有毒的代谢废物，因此在培养容器内部保持一个完全无菌的环境是绝对必须的。
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（三）灭菌、消毒种类
物理方法：
物理灭菌：高温高压灭菌（干热/湿热）、烘烤或灼烧灭菌、射线处理、超声波等
物理除菌：过滤（、、、） 、离心沉淀等；
化学方法：使用灭菌剂，如薰蒸灭菌、消毒液灭菌（酒精、升***、苯酚、漂白精、新洁尔灭、次***酸钠、过氧化氢）
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消毒、灭菌的对象：
★ 接种室
★ 材料（外植体）：
完全杀死材料表面的微生物过程：
洗洁精→酒精→***化***等
★器皿用具消毒（灭菌）
★ 培养基
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（三）、培养基、器具的灭菌
用灭菌锅灭菌：一般121℃，灭菌20分钟。自动锅：