文档介绍：细胞培养的设备和操作技术
第二章
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主讲内容
实验室的设计和基本操作技术
培养基及其配制
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第一部分
实验室的设计
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细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：
技术
三、接种技术
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一、 洗涤技术
、洗涤目的：去除杂物，降低带菌量
、根据洗涤对象的不同，主要分为：
器皿洗涤（包括玻璃、塑料、搪瓷、
不锈钢器皿）
培养材料洗涤
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（一）器皿洗涤
根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种：
特殊洗涤
微生物大量污染的洗涤
常规洗涤
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常规洗涤
△ 自来水洗去油渍、霉菌等脏物；
△ 温肥皂水中浸泡一定时间后用刷子刷净；
△自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；
△ 蒸馏水淋洗内外壁
△ 将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（50～75℃）
△ 放入除尘柜中备用
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微生物大量污染的洗涤
△ 微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤
特殊洗涤（如沾有蛋白质类物质或其它有机物时)
△ 经过常规洗涤未过蒸馏水的器具，浸泡入洗液（铬酸洗涤液是用***钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成）中数分至数小时；
△ 回收洗液，器具先用自来水洗净，蒸馏水淋洗，烘干（75℃）
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（二）、试验材料的清洗
清洗目的：来自自然界的试验材料，包括来自土壤中的幼茎、磷茎，滋生着各种微生物，尤其是细菌的芽孢和真菌的孢子，一旦与培养基接触，就会很快的繁殖起来，造成培养基和培养材料的污染。
清洗方法：先用自来水冲洗5分钟，然后用中性洗涤剂清洗，注意勿损伤试验材料。再用自来水流水冲洗半小时，用于下一步的药剂灭菌。
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二、灭菌、消毒技术
（一）关于有菌和无菌的概念
有菌的范畴：
凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的，如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。
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高压高温处理（工具、器皿、培养基等）
物理或化学处理；
火烤后的物体；
健康的动植物不与内外部表面接触的组织
内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但
不会影响培养，也不会污染）
无菌的范畴：
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（二）灭菌、消毒技术作用和意义
植物组培中，凡用于培养和无菌操作的房间、器具、培养瓶、培养基，培养材料和操作者的衣物和手都应随时进行灭菌，以确保不受杂菌污染，否则，由于杂菌的生长繁殖速度一般都比培养的组织快得多，最终将把组织全部杀死，这些污染微生物还可能排泄对植物组织有毒的代谢废物，因此在培养容器内部保持一个完全无菌的环境是绝对必须的。
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（三）灭菌、消毒种类
物理方法：
物理灭菌：高温高压灭菌（干热/湿热）、烘烤或灼烧灭菌、射线处理、超声波等
物理除菌：过滤（、、、） 、离心沉淀等；
化学方法：使用灭菌剂，如薰蒸灭菌、消毒液灭菌（酒精、升***、苯酚、漂白精、新洁尔灭、次***酸钠、过氧化氢）
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消毒、灭菌的对象：
★ 接种室
★ 材料（外植体）：
完全杀死材料表面的微生物过程：
洗洁精→酒精→***化***等
★器皿用具消毒（灭菌）
★ 培养基
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（三）、培养基、器具的灭菌
用灭菌锅灭菌：一般121℃，灭菌20分钟。自动锅：加足水后，调好时间、温度、即可自动运转。
手动锅:加足水后，关好，通电。／c㎡时，打开排气阀排除锅内的冷空气。然后关闭排气阀，／ c㎡(121 ℃左右)时计时，用通电、断电来保持20分钟。待降至压力为0时取出。
器具的灭菌：也可用烘箱160 ℃，90～120分钟
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（四）、过滤除菌
培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇到高温分解（如某些激素GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌或者两者结合。另外酶等也需要过滤灭菌；
灭菌方法：将激素或酶配成一定浓度，用注射器过虑，－。配制培养基时，先将培养基高压灭菌，待温度降至50℃左右时，加入适量的已过虑除菌的激素等，然后分装。
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（五）、外植体的选择与消毒：
1、外植体的选择
选择优良的基因型：蔬菜等作物、花卉等观赏植
物等的脱毒快繁选优良种。