文档介绍:(资料性)
植物和动物组织样本的处理方法
植物组织样本的处理方法
植物组织样本固定处理
植物组织样本固定处理步骤如下:
操作人员提前准备好大小合适的容器,配制2次使用量的卡诺氏固定液(乙醇:冰醋酸=3:1),置于冰上或在-20℃的
(资料性)
植物和动物组织样本的处理方法
植物组织样本的处理方法
植物组织样本固定处理
植物组织样本固定处理步骤如下:
操作人员提前准备好大小合适的容器,配制2次使用量的卡诺氏固定液(乙醇:冰醋酸=3:1),置于冰上或在-20℃的温度下预冷;
固定液体积不应超过容器容积的四分之三。
配制2次使用量的蔗糖-PBS缓冲液(3%),;
使用酒精对工具进行消毒并擦干,剪取植物材料,迅速放入预冷的卡诺氏固定液中,置于冰上或-20℃温度下固定1小时;
去净固定液,加入新鲜的预冷过的卡诺氏固定液中,置于冰上或-20℃温度下固定1小时;
滤去固定液,加入预冷的蔗糖-PBS溶液(3%),冰上放置1小时;
滤去溶液后,重新加入新的预冷蔗糖-PBS溶液(3%),在4℃的温度下放置过夜;
准备包埋盒并进行信息标记,加入OCT后置于冰上预冷;
滤去液体后,同镊子轻夹出样本,吸干表面液体后将样本剪切成合适包埋的尺寸,放入包埋盒中;
固定后的植物样本非常绵软,在夹出及修剪尺寸时要注意力度。
调整样本方向,将样本横切面垂直于包埋盒一侧的侧壁,使横切面贴在侧壁上方便后续切片;
将装有样本的包埋盒水平放置于小冰盒中,并将其水平放置于真空抽滤的干燥器,真空抽滤5分钟(-);
将包埋盒水平放置于有盖容器中,盖上盖子于4℃的温度下放置过夜后即可进行包埋,。
植物组织样本直接包埋前处理
植物组织样本包埋前处理步骤如下:
使用酒精对工具进行消毒并擦干;
取植物样本,用剪刀剪下测试部位,并将样本剪切至便于包埋的尺寸;
以叶片为例, cm的小条,尽量控制叶片宽度短于包埋盒长度,若叶片过大可按需要修剪。
用镊子夹起剪切好的植物样本,快速放入在冰上预冷的OCT包埋盒中,并调整样本方向;
以叶片为例,将叶片条竖起,横切面正对包埋盒的底面,将叶片条沿着包埋盒的一遍竖直排列在OCT中,用镊子将叶片条轻轻往下压,使叶片横切面尽量贴到包埋盒底部,尽量保持叶片条垂直于包埋盒底部,不倾斜;以花序为例,用镊子将花序轻轻下压,使花序以侧面方向贴到包埋盒底面,并用镊子轻压每朵消化,使其尽量贴到包埋盒底面。
将装有植物样本的包埋盒水平放置到冰盒中,再将冰盒水平放置于真空抽滤的干燥器中真空抽滤5分钟(-);
抽滤后,材料位置会发生一定变化,再次用镊子轻压样本,使样本贴在包埋盒底面上,以方便后续切片;
。
动物组织样本的处理方法
动物组织样本处理(灌流取样法)
动物组织样本处理步骤如下:
根据动物类型选择合适的麻醉剂,对实验动物进行深度麻醉,应确保对实验动物的四肢或肌肉进行动作时,无任何疼痛或应激反应;
将动物头部固定在立体定位仪上,沿胸骨柄剪开胸腔,剪开心包膜,暴露心脏。与心尖成30°~45°夹角剪开左心室,随即剪开右心耳,将灌注针头从左心室插入主动脉,固定针头;
灌注常温通氧的人工脑