文档介绍：第十四章免疫学检测技术
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经典的免疫学方法：
一、凝集反应（agglutination）
细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结
合后形成凝集团块的反应。
1、直接凝集反应
2、间接凝集反应
3、（同RIA）
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（三）酶免疫测定（EIA） 1、均相酶免疫测定（HEI）
特点：仅需将待测样品、酶标试剂和底物溶液混合，待抗原抗体反应完成即可直接测定结果，整个检测过程都在均匀的液相中进行。
以酶放大免疫测定技术（EMIT）为例：
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2、非均相酶免疫测定
（1）液相酶免疫测定（液相EIA）：
同RIA：抗原、酶标抗原、抗体相继加入后，使反应达到平衡，再加分离剂。
（2）固相酶免疫测定（固相EIA）：
AgAb反应在固相载体的表面进行，应用最广泛的是酶联免疫吸附试验（ Enzyme linked immunosorbent assay ——ELISA ）
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1） ELISA 基本原理
将抗原或抗体结合到固相载体的表面，并保持其免疫活性。
抗原或抗体与酶连接成酶标抗原或抗体，仍分别保持其免疫活性和酶活性。
在固相载体上按照一定的步骤加入待测抗原或抗体及酶标抗体或酶标抗原，洗去未结合的游离物质，加入酶的底物显色，颜色的深浅与待测物质含量呈相关性。
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2）固相载体的种类
A、塑料制品
聚苯乙烯：蛋白质非共价键或物理吸附结合到载体表面，可制成小试管、小珠、微量反应板的形式专用于ELISA的微量反应板——ELISA板（812=96孔）
B、微颗粒
高分子单体聚合成的微球或颗粒，带有能与蛋白质结合的功能基团，易于化学偶联，结合容量大。反应时可均匀的分散到整个反应溶液中，反应速度快。其中可包裹磁性物质，制成磁化微颗粒，使分离可在磁板中完成，自动化分析。
C、膜载体
NC膜（硝酸纤维素膜）、玻璃纤维素膜、尼龙膜等微孔滤膜。非共价键吸附Ab/Ag，吸附能力强。广泛应用于斑点-ELISA等。
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3）ELISA方法类型及反应原理
A、双抗体夹心法
此法是检测大分子抗原的常用方法。
上述方法亦可改为双位点一步法，使用针对抗原分子上两个不同表位的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶标抗体。注意钩状效应。
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B、间接法
此法是测定抗体的常用方法。可以用一种酶标抗
抗体检测多种抗体。
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C、竞争结合法
可用于测定小分子抗原或半抗原及抗体。以检测抗原为例，待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，结合于固相的酶标抗原量与标本中待测抗原含量呈反比。
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D、捕获法——最常用于检测IgM抗体包被抗人IgM 链+待测标本----IgM类抗体全被固相抗体捕获------洗涤+ 特异性抗原（针对待测IgM的相应抗原）与固相上特异性IgM结合+酶标抗体（针对特异性Ag的）+底物----显色-----显色表示有特异性IgM。
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E、 BAS-ELISA
生物素（B） -亲和素（A）系统（ biotin avidin system，BAS）是以生物素和亲和素具有的独特结合特性为基础，它们的结合迅速、专一、稳定，并具有多级放大效应。
应用生物素亲和素放大系统的ELISA，使反应信号放大，检测灵敏度提高。
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1个亲和素（链霉亲和素）可结合四个生物素衍化物
1个抗体可结合多个B，与蛋白质-NH2结合形成
肽键，-NH2越多，标记B越多。
E   B Ag? E—B— A—B—E B Ab B B B E E—B—A—B—E
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BAS-ELISA包括：ABC-ELISA （间接法、双抗体夹心法） BA-ELISA （间接法、双抗体夹心法） BAB-ELISA （间接法、双抗体夹心法）例如：BAB-ELI